AGEs加劇MDSCs對AMI小鼠心肌損傷的研究.pdf

1、目的：
　　1.明確心肌梗死小鼠的外周血以及梗死心肌部位髓源性抑制細(xì)胞浸潤增加；發(fā)現(xiàn)了糖基化終產(chǎn)物能增加小鼠外周血以及梗死心肌區(qū)域的髓源性抑制細(xì)胞的浸潤；初步證實糖基化終產(chǎn)物通過髓源性抑制細(xì)胞加重心肌梗死小鼠的心肌損傷，并探索可能的機制；為糖尿病合并心?；颊咝募」Ｋ兰又氐脑蛱峁┻M一步的臨床理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.選擇雄性20-25g C57 BL/6J小鼠，分為四組：假手術(shù)組小鼠、假手術(shù)+AGEs組、急性心肌

2、梗死組、急性心肌梗死+AGEs組。術(shù)前，假手術(shù)+AGEs組和急性心肌梗死+AGEs組小鼠給予腹腔注射AGEs25 mg/kg/d，每天一次，連續(xù)三天；假手術(shù)組和急性心肌梗死組小鼠各給予同等體積的0.9％的生理鹽水腹腔注射，每天一次，連續(xù)三天。在氣管插管使用呼吸機的情況下，假手術(shù)小鼠開胸后在冠狀動脈前降支處穿線但不結(jié)扎，手術(shù)小鼠結(jié)扎冠狀動脈前降支且肉眼可見結(jié)扎區(qū)域以下心肌缺血變白。術(shù)后12小時對小鼠心臟行M超檢查，再次明確造模是否成功。<

3、br>　　2.術(shù)后24小時處死小鼠，收集小鼠的骨髓、脾臟、血液、心臟。取小鼠的心臟，給予HE染色、免疫組化、免疫熒光、細(xì)胞凋亡檢測；取小鼠的血液、脾臟、骨髓流式檢測CD11b+Gr-1+細(xì)胞；心肌組織提取RNA，用RT-PCR檢測CD11b+，Ly6G+，炎癥因子IL-6，iNOS的基因表達；通過定量RT-PCR檢測CD11b+Gr-1+、CD11b+Gr-1-細(xì)胞中RAGE（AGEs受體）mRNA的表達。
　　3.提取小鼠骨髓的

4、CD11b+Gr-1+細(xì)胞，用不同濃度的AGEs刺激24小時后觀察細(xì)胞的形態(tài)，并收集細(xì)胞培養(yǎng)液用Elisa法檢測炎癥因子IL-6、TNF-α的變化。
　　結(jié)果：
　　1. AMI后24小時，通過免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)心肌梗死小鼠較假手術(shù)小鼠的心肌組織髓源性抑制細(xì)胞CD11b+Gr-1+數(shù)量顯著增加；通過流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)外周血中髓源性抑制細(xì)胞CD11b+Gr-1+百分比增加，脾臟中CD11b+Gr-1+百分比減少，骨髓中CD11b+G

5、r-1+無明顯改變；在梗死的心肌中CD11b和Ly6G基因表達上調(diào)。免疫組化進一步證實心肌梗死區(qū)域的CD11b+細(xì)胞數(shù)量增加。
　　2.腹腔注射AGEs后，心肌梗死小鼠的血液中CD11b+Gr-1+的百分比進一步增加，心肌梗死及邊緣區(qū)域的CD11b+細(xì)胞數(shù)量明顯增加；假手術(shù)組小鼠加入AGEs后檢測到CD11b+Gr-1+、CD11b+Gr-1-細(xì)胞表面的AGEs受體（RAGE）增加，提示AGEs可能通過RAGE來調(diào)節(jié)髓源性抑制細(xì)胞

6、的浸潤。
　　3. AGEs+心肌梗死組小鼠的心梗面積增加，射血功能減低，心肌細(xì)胞凋亡加劇。與結(jié)果2結(jié)合考慮，提示AGEs可能通過髓源性抑制細(xì)胞加重了心肌梗死小鼠的心肌損傷。
　　4.加入AGEs后心肌部位的炎癥因子IL-6和iNOS進一步增加，此結(jié)果與髓源性抑制細(xì)胞的變化相一致。
　　5.體外實驗中AGEs刺激骨髓分離的CD11b+Gr-1+細(xì)胞后，炎癥因子IL-6、TNF-α分泌增多，且在顯微鏡下觀察到受刺激的CD