自發(fā)性腦出血中紅細胞對AQP-4的影響及其與血腦屏障通透性的關(guān)系.pdf

1、背景：自發(fā)性腦出血(SICH)是指在非外傷所致的大腦實質(zhì)內(nèi)突然自發(fā)性的出血，是臨床上致殘、致死率很高的神經(jīng)系統(tǒng)常見的疾病之一。在亞洲國家占腦卒中的20％～30%，但是其死亡率卻是最高，而導(dǎo)致腦出血死亡率高的主要原因之一就是腦水腫，自發(fā)性腦出血后血腫的不斷擴大是導(dǎo)致患者的病情漸惡化的主要原因。SICH后腦水腫的形成機制至今尚未闡明。研究顯示，SICH后血腫中的主要成分（本課題擬研究紅細胞）與出血后不同階段腦水腫的形成關(guān)系密切，并且水通道蛋

2、白4（AQP-4）在腦組織中水的運轉(zhuǎn)過程中起著重要作用。本課題從紅細胞對腦水腫形成和對 AQP-4表達影響的角度來研究在 SICH中，紅細胞與腦水腫形成、AQP-4的表達、血腦屏障（BBB）通透性之間的關(guān)系，以期為SICH后腦水腫防治方面提供實驗和理論依據(jù)，這是本課題的創(chuàng)新之處，目前國內(nèi)外尚未見報道。
　　目的：
　　1．闡明SICH中，紅細胞對AQP-4表達的影響；
　　2．探討SICH后腦水腫形成過程中，AQP-4

3、的表達與BBB通透性的關(guān)系。
　　方法：本實驗動物模型選用健康成年清潔級 SD（ Sprague Dawley）大鼠共195只，雄性，體重約210～300g，由河南科技大學醫(yī)學院動物實驗中心提供。將SD大鼠隨機分為四組；即紅細胞（RBC）組，全血（WB）組、假手術(shù)（SO）)組、正常對照（NC）組。其中 RBC組、WB組、SO組按處死時間（6h、1d、3d、5d）再分為四個亞組，每組15只（5只測腦水含量、AQP-4mRNA，5只用

4、于檢測水腫區(qū)域病理改變和AQP-4陽性細胞分布情況，5只用于檢測EB含量）。制作模型：用腦立體定位儀向各組 SD大鼠右側(cè)尾狀核注入自體 WB或 RBC以建立 SICH模型，并按 Bederson方法判斷模型是否成功。采集標本，檢測腦組織依文思藍（EB）含量；AQP-4 mRNA變化；腦含水量；HE染色及免疫組化AQP-4的陽性細胞分布情況。
　　結(jié)果：
　　1．腦組織EB含量：在RBC、WB、SO、NC組6h、1d、3d、5

5、d的組內(nèi)比較，其中在 RBC組-3d顯著高于6h、1d、5d組；組間相比，RBC組-6h時出現(xiàn)升高，第1d時升高明顯，3d達到高峰，5d時降低但仍高于正常水平，WB組與 RBC組在各時間點 EB含量變化規(guī)律相似，但均低于RBC組；SO組與NC組比較無差異。
　　2．腦含水量檢測：在 RBC組內(nèi)不同時間點相比，其第3d時結(jié)果提示顯著比6h、1d、5d組高；組間相比，RBC與WB組各時間點間相比，其腦組織水含量變化趨勢規(guī)律基本相似，但

6、WB組稍低于RBC組。
　　3．RT-PCR檢測AQP-4 mRNA表達：RBC組內(nèi)各時間點相比，RBC組-3d顯著高于6h、1d、5d組，RBC組-6h后腦組織AQP-4 mRNA表達開始增高，第3d達到高峰，之后逐漸下降，在第5d時仍高于正常水平；WB組與RBC組AQP-4 mRNA的表達規(guī)律基本相似，但低于RBC組。
　　4．免疫組化檢測 AQP-4表達結(jié)果示：RBC組和 WB組的3d時都可見AQP-4在神經(jīng)膠質(zhì)細胞以

7、及其足突的表達，其胞漿呈棕黃著色。
　　結(jié)論：
　　1.腦組織水含量在RBC組和WB組在第3d時最高，提示RBC在SICH后第3d腦水腫的形成中有作用，說明RBC是SICH后腦水腫形成過程中的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　2.在 RBC組和 WB組第3d時 AQP-4陽性表達最強，提示 RBC可引起AQP-4的表達。
　　3. BBB通透性在RBC組和WB組的通透率最高，而且從6h時開始出現(xiàn)升高，第3d達到高峰，說明SIC