板黨多糖對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的防治作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:用三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇灌腸誘導(dǎo)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎疾病模型，和脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠單核巨噬細(xì)胞（RAW264.7）炎癥模型,給予適量板黨多糖，觀察大鼠全身及局部狀況和RAW264.7細(xì)胞的變化，探討板黨多糖的防治作用及其機(jī)理,為后續(xù)研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　1、板黨多糖防治大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的作用
　　方法：SD大鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常組、模型組、板黨多糖低、中、高（0.25，0.5

2、0，1.00 g/kg）劑量組、固腸止瀉丸組（1.08 g/kg）。各組按相應(yīng)劑量灌胃給藥5天后，以TNBS60mg/kg灌腸造模，每天1次連續(xù)灌胃給藥3周。造模后第1，2，3及21天進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)價(jià)，末次給藥30 min后乙醚麻醉，斷頭處死大鼠。取大鼠的結(jié)腸組織先進(jìn)行黏膜損傷指數(shù)評(píng)價(jià)（CMDI）后，取一半組織進(jìn)行HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察組織形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行組織病理學(xué)檢查并評(píng)分,另一半-80℃保存，用作實(shí)時(shí)熒光定量PCR樣本

3、。
　　結(jié)果：與正常組比，模型組大鼠見潰瘍?nèi)庋磕[，病灶腸壁變厚，大部分大鼠有腸粘連，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況嚴(yán)重，CMDI評(píng)價(jià)及病理學(xué)組織評(píng)分升高，具有顯著性（P＜0.01、P＜0.01）；與模型組比較，板黨多糖組大鼠結(jié)腸充血水腫、潰瘍癥狀減輕，組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示板黨多糖組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況明顯改善，CMDI評(píng)價(jià)及病理學(xué)組織評(píng)分明顯降低（P＜0.01、P＜0.01）。
　　2、板黨多糖防治大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制研究
　　

4、方法：分組及給藥方法同第一部分。末次給藥30 min后乙醚麻醉，斷頭處死大鼠。留取血清，檢測(cè)血清中SOD、MDA及GSH-Px活力，取大鼠的另一半結(jié)腸組織,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)其中TLR4，IL-6，NF-κB， TNF-α及IL-10的mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：與模型組比較，組織內(nèi)MDA含量降低明顯（P＜0.01），SOD及GSH-Px活力升高（P＜0.01、P＜0.01），具有顯著性差異；對(duì)TLR4，IL-6，NF-κB

5、，TNF-α mRNA表達(dá)具有下調(diào)作用（P＜0.01、P＜0.01、P＜0.01、P＜0.01），對(duì)IL-10 mRNA表達(dá)具有上調(diào)作用（P＜0.05）。
　　3、板黨多糖對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響
　　方法：首先利用MTT法確定不同濃度板黨多糖、LPS及板黨多糖+LPS對(duì)RAW264.7細(xì)胞毒性的影響。然后考察細(xì)胞培養(yǎng)基中NO的含量，確定LPS合適的誘導(dǎo)細(xì)胞時(shí)間及濃度，并建立體外炎癥模型，研究不同濃度

6、的板黨多糖（0.4、4、40μg/mL）對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響。硝酸還原法考察細(xì)胞培養(yǎng)基中NO的含量，來評(píng)價(jià)板黨多糖的抗炎作用，并采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測(cè)細(xì)胞中 TLR4，IL-6，NF-κB，TNF-α的mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:板黨多糖在0.4~4000μg/mL濃度范圍72h內(nèi),對(duì)RAW264.7細(xì)胞無細(xì)胞毒作用；LPS在0.1~10μg/mL濃度范圍48h內(nèi),對(duì)RAW264.7細(xì)胞無細(xì)胞毒作

7、用；確定以1μg/mLLPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞作用24 h產(chǎn)生炎癥,建立體外炎癥模型。與正常對(duì)照組比，板黨多糖對(duì)RAW264.7細(xì)胞單獨(dú)作用24h后，給藥組培養(yǎng)基中NO的含量差異無顯著性（P＞0.05）；1μg/mL LPS誘導(dǎo)并給藥24h后，與正常對(duì)照組比，LPS組細(xì)胞釋放NO的量顯著增高（P＜0.01），IL-6、TNF-α、NF-κB、TLR4的表達(dá)量明顯升高，差異顯著（均為P＜0.01），與LPS組比，給藥組培養(yǎng)基中釋放的