茅蒼術(shù)的血清藥物化學(xué)和血清藥理學(xué)研究.pdf

1、茅蒼術(shù)Atractylodes lancea(Thunb.) DC.為菊科多年生草本植物，其根莖具有燥濕健脾，祛風(fēng)散寒，明目等作用，為臨床常用中藥。茅蒼術(shù)是江蘇省著名道地藥材，公認(rèn)為優(yōu)質(zhì)的蒼術(shù)商品。目前對茅蒼術(shù)的研究多集中于化學(xué)成分和藥理作用，但其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)至今尚未闡明，致使其作用機(jī)制、生物轉(zhuǎn)化和代謝過程等系列研究無從著手，直接制約了它的發(fā)展。因此，研究茅蒼術(shù)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，制定與臨床療效相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)迫在眉睫?；谌胙煞植攀侵兴庴w

2、內(nèi)的直接作用物質(zhì)，本研究采用HPLC及UPLC-MS等技術(shù)，建立茅蒼術(shù)的化學(xué)及含藥血清的指紋圖譜，對特征峰所歸屬的成分進(jìn)行推斷，并對入血成分進(jìn)行分離、歸屬和鑒定;采用血清藥理學(xué)方法，以已知成分的含藥血清為對象，從細(xì)胞水平分析入血成分與傳統(tǒng)療效的相關(guān)性，以揭示茅蒼術(shù)的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為進(jìn)一步研究藥物進(jìn)入體內(nèi)后化學(xué)成分的吸收、分布和代謝等體內(nèi)動態(tài)提供依據(jù)，為建立中藥全面、系統(tǒng)、客觀的質(zhì)量評價(jià)體系奠定基礎(chǔ)。
　　(1)茅蒼術(shù)水煎液指紋

3、圖譜研究與UPLC-MS成分分析。中藥傳統(tǒng)的給藥模式為水煎液口服給藥，本實(shí)驗(yàn)在文獻(xiàn)記載的基礎(chǔ)上，利用HPLC法對茅蒼術(shù)樣品的色譜條件等進(jìn)行檢測，得出了最適于分析的色譜條件，建立了茅蒼術(shù)水煎液的體外指紋圖譜;利用UPLC-MS對水煎液進(jìn)行分析，檢出26個(gè)化學(xué)成分，并鑒定了23個(gè);測定了茅蒼術(shù)水煎液中的主要化學(xué)成分蒼術(shù)苷A的含量，平均是2.775 mg·g-1。以此初步制定了茅蒼術(shù)水煎液的體外質(zhì)量評價(jià)方法。
　　(2)茅蒼術(shù)血清藥物化

4、學(xué)研究。中藥經(jīng)過代謝進(jìn)入血液中的成分才是其體內(nèi)直接作用物質(zhì)，本研究利用茅蒼術(shù)水煎液體外成分分析的方法，建立了含藥血清的指紋圖譜;在此基礎(chǔ)上，通過比較分析茅蒼術(shù)水煎液、含藥血清和空白血清三者的指紋圖譜，對口服茅蒼術(shù)水煎液后的入血成分進(jìn)行分析，確定大鼠血清中來源于茅蒼術(shù)水煎液的原型成分及其代謝產(chǎn)物。結(jié)果鑒定了入血成分15個(gè)，其中原型成分11個(gè)，4個(gè)為經(jīng)過代謝新產(chǎn)生的成分，即血中移行成分。經(jīng)鑒定，原型成分分別為蒼術(shù)苷C、茅蒼術(shù)醇、蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅳ、

5、漢黃芩素、蒼術(shù)素、3，5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸、扁枝醇、蒲公英甾醇乙酸酯、豆甾醇、β-金合歡烯，4個(gè)移行成分中，1號峰所對應(yīng)的成分有待進(jìn)一步確定，其余為紫丁香苷、β-香樹脂酸乙酸酯、3，4，11，14-四羥基愈創(chuàng)-9-烯-11-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。推測以上11個(gè)成分可能是茅蒼術(shù)的藥效物質(zhì)，為其體內(nèi)作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制的闡明奠定了基礎(chǔ)。
　　(3)茅蒼術(shù)血清藥理學(xué)研究。采用血清藥理學(xué)方法，通過對茅蒼術(shù)水煎液及其灌胃給藥

6、所得的大鼠含藥血清的總還原能力、清除自由基(DPPH·、O2-·、OH-·)和對幾種酶(GSH-Px、MDA、SOD、CAT)活性的作用進(jìn)行綜合評價(jià);同時(shí)，利用H9c2大鼠心肌細(xì)胞，以H2O2造成細(xì)胞氧化損傷模型，測定茅蒼術(shù)水煎液及其含藥血清對H9c2心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)茅蒼術(shù)水煎液及其含藥血清具有很好的抗氧化作用，表明以上研究鑒定的入血成分中全部或部分是茅蒼術(shù)發(fā)揮抗氧化作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明提供了依據(jù)，

7、為建立全面、客觀的質(zhì)量評價(jià)體系奠定了基礎(chǔ)。
　　(4)茅蒼術(shù)給藥大鼠的尿液代謝成分分析。對給藥后的大鼠尿液代謝物進(jìn)行分析，有助于明確藥物在體內(nèi)的最終代謝產(chǎn)物，有助于研究清楚藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)化過程，從而探討藥物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究對比分析了茅蒼術(shù)給藥后2h、6h、24 h的大鼠尿液成分變化，結(jié)果給藥后2h尿液中成分峰最多，各成分含量也較高;給藥后24 h尿液所含成分最少，但34.527 min和37.674 min的峰面積增大，初步