定量蛋白質組學分析卵巢癌細胞高轉移的機制.pdf

1、在女性生殖器官惡性腫瘤中，卵巢發(fā)病率排名第三，死亡率占首位。其中，遠端轉移是卵巢上皮癌高復發(fā)率和高死亡率的重要原因之一。研究卵巢癌的轉移機制可以幫助我們對卵巢癌進行靶點治療和預后評估，提高患者生存率。
　　蛋白質組學本質上是通過在大規(guī)模水平上研究蛋白質的特征，從而獲得蛋白質水平上的關于疾病發(fā)生、細胞代謝等過程的全面整體的認識。質譜技術是蛋白質組學研究中最重要的鑒定技術，其基本原理是樣品分子離子化后，根據不同離子的質荷比(m/z)差

2、異來分離離子并確定分子量。
　　我們以人卵巢癌細胞HO-8910細胞及其高轉移細胞系HO-8910 PM為研究對象，通過劃痕實驗和細胞增殖實驗，發(fā)現HO-8910 PM細胞遷移速度變快、細胞增殖變快。因此，運用定量蛋白質組學方法，研究HO-8910 PM和HO-8910細胞系間蛋白質表達的區(qū)別，從而闡明HO-8910 PM細胞轉移增強的機制。收取對數期HO-8910及HO-8910 PM細胞，全蛋白裂解后，進行SDS聚丙烯酰胺凝膠

3、電泳，用考馬斯亮藍染色，脫色后用胰酶將膠粒中的蛋白質酶解成肽段。將肽段萃取出并用等重同位素標記試劑TMT進行標記，除鹽后用質譜儀進行分析。質譜數據用Proteome Discoverer Searching Algorithm(version1.3)搜索UniprotHuman數據庫進行分析，得到的Uniprot Accession使用DAVID等在線軟件進行信號通路的匹配和分析。選取變化明顯的信號通路的相關蛋白進行qPCR和Weste

4、rn blotting驗證。
　　結果分析發(fā)現，在HO-8910 PM中有664種蛋白表達量升高，涉及核糖體組成、細胞骨架、細胞黏附、吞噬作用、細胞內吞、糖酵解及丙酮酸代謝等通路。我們發(fā)現在HO-8910 PM細胞系中，和上皮細胞向間質細胞轉化(EMT)過程相關蛋白S100A4，波形蛋白高表達，證明HO-8910 PM細胞系EMT過程加強。在組學數據中我們發(fā)現HO-8910 PM中膜聯蛋白A3，CDK5、Arf6和RAS等相關蛋白