一株銅綠假單胞菌RNA噬菌體的分離和鑒定.pdf

1、近幾年來，由于抗生素在臨床以及畜牧養(yǎng)殖業(yè)的大量使用，而新抗生素的開發(fā)少之又少，使得細(xì)菌的耐藥性問題日益嚴(yán)峻，甚至出現(xiàn)了幾乎無藥可用的“超級細(xì)菌”，這給臨床治療帶來了非常嚴(yán)重的挑戰(zhàn)，尤其是多重耐藥菌株的抗感染問題已經(jīng)成為目前臨床治療的難點(diǎn)。銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa, PA），也被稱為綠膿桿菌，是臨床上常見的革蘭陰性條件致病菌，在自然界中分布極為廣泛，各種水、空氣、正常人的皮膚、呼吸道和腸道等都有存在。作為

2、醫(yī)院內(nèi)感染的主要病原菌之一，銅綠假單胞菌對多種抗生素都具有耐藥性，在此背景下，尋找抗銅綠假單胞菌感染的新的治療方法十分必要。
　　噬菌體是一類在自然界中廣泛分布，專性感染以及裂解細(xì)菌的病毒。其基因數(shù)目較少，增殖速度較快又易于培養(yǎng)。1915年，噬菌體由Frederick W.T.首次發(fā)現(xiàn)，此后人們就嘗試用噬菌體來治療細(xì)菌性感染，但一直都未能取得根本性的突破。近幾年來，由于細(xì)菌耐藥性的問題日益嚴(yán)重，噬菌體治療重新回歸人們視野，并被認(rèn)為

3、是抗生素治療之外的又一種抗感染手段。
　　本文以一株可以分泌紅色色素的銅綠假單胞菌臨床分離株P(guān)AO38為宿主菌，從西南醫(yī)院下水道污水中分離得到了一株可以將其裂解的RNA噬菌體，我們將其命名為PaP6。得到該噬菌體后，對其生物學(xué)特性進(jìn)行了重點(diǎn)研究，包括其最佳感染復(fù)數(shù)、一步生長曲線、結(jié)構(gòu)蛋白、氯仿敏感性以及宿主譜等。這些數(shù)據(jù)為今后對其進(jìn)一步的深入研究、基因工程改造、噬菌體治療等研究奠定了必要的基礎(chǔ)，并且豐富了對噬菌體多樣性的認(rèn)識。研究

4、內(nèi)容及結(jié)果具體包括以下幾個方面:
　　1.以銅綠假單胞菌PAO38為宿主菌，從西南醫(yī)院的污水中分離得到一株可以裂解PAO38菌株的噬菌體，命名為PaP6(Pseudomonas aeruginosa Phage6)。電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)PaP6有一個正多面體的頭部，頭部大小約為45 nm。
　　2.提取噬菌體PaP6的基因組，電泳分析表明該基因組天然以三個節(jié)段存在。酶切分析表明，該基因組為雙鏈結(jié)構(gòu)，對DNAase不敏感，但對RNA

5、ase敏感，說明其為RNA噬菌體，且三個片段長度分別約為9 Kb、4.5 Kb和3.5 Kb，全基因組約17kb。
　　3.實(shí)驗(yàn)還測定了噬菌體PaP6的最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)以及一步生長曲線。其MOI為0.1，噬菌體滴度達(dá)到了8.5×109 PFU。噬菌體PaP6感染宿主菌的潛伏期約是10 min，爆發(fā)期約為50 min，得出PaP6感染宿主菌PAO38的爆發(fā)量約為10。
　　4.PaP6可以感染40.1％的銅綠假單胞菌臨床