腎細胞癌中DACT2基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)與mRNA表達的研究.pdf

1、目的：腎細胞癌(Renal Cell Carcinoma，RCC)是一種比較常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率在泌尿系腫瘤中僅次于膀胱癌居第二位。由于RCC的惡性程度較高，初期癥狀不明顯，使得大量患者延誤診治，嚴重影響患者的治愈率和生存率。近年來大樣本的流行病學研究表明，RCC發(fā)病率呈逐年上升趨勢，且發(fā)病年齡日趨年輕化，因此RCC的早期診斷與治療是近期研究的熱點。
　　表觀遺傳學是一門研究DNA序列不變而其基因表達發(fā)生遺傳性改變的遺

2、傳學分支學科。表觀遺傳學改變表現(xiàn)為：DNA核苷酸胞嘧啶的甲基化修飾、組蛋白修飾、非編碼RNA干擾的調(diào)節(jié)等。近年來，DNA甲基化是表觀遺傳學的研究熱點。研究發(fā)現(xiàn)，DNA甲基化的發(fā)生與許多癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其中包括RCC。DACT2基因是DCAT家族的一員，其定位于人類染色體6q27。研究表明，DACT2基因的表達在泌尿系的輸尿管以及腎臟集合管的形成發(fā)育過程中十分重要。同時，DACT2基因具有控制集合管的形態(tài)學發(fā)生的作用。有文獻報道，

3、DACT2基因能通過抑制Wnt信號通路進而抑制肝癌的發(fā)生發(fā)展。同時，DACT2基因在肝癌、肺癌、胃癌、食管癌以及結(jié)腸癌等中均表達降低。國內(nèi)外已有大量的實驗研究表明，許多癌癥發(fā)生時，DACT2基因因啟動子區(qū)發(fā)生甲基化而表達沉默進而失去其抑制癌癥發(fā)生發(fā)展的作用。但是RCC的發(fā)生發(fā)展是否與DACT2基因發(fā)生甲基化相關(guān)，迄今為止仍未見報道。
　　本研究以59例RCC患者術(shù)后標本為研究對象，通過分析RCC組織、癌旁組織以及相應正常腎組織中D

4、ACT2基因的啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)及其mRNA的相對表達水平，并聯(lián)系臨床數(shù)據(jù)進行相關(guān)分析，旨在進一步揭示RCC的發(fā)病機制，為RCC的早期發(fā)現(xiàn)、診治與預后的判斷提供相應的實驗理論依據(jù)。
　　方法：
　　1應用甲基化特異性聚合酶鏈反應(Methylation Specific PCR，MSP)檢測59例RCC患者術(shù)后標本的正常腎組織、癌旁組織及癌組織中DACT2基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)。并對DACT2基因異常甲基化狀態(tài)與RCC的發(fā)生

5、發(fā)展及臨床資料進行相關(guān)統(tǒng)計學數(shù)據(jù)分析。
　　2用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(Reverse Transcriptase-PCR，RT-PCR)技術(shù)檢測59例RCC患者術(shù)后標本的正常腎組織、癌旁組織及癌組織中DACT2基因的mRNA相對表達量。并對DACT2基因mRNA在RCC中的相對表達量與臨床資料進行相關(guān)統(tǒng)計學數(shù)據(jù)分析。
　　3將59例RCC組織按照是否發(fā)生甲基化分為發(fā)生甲基化的RCC組(簡稱甲基化組)和未發(fā)生甲基化的RCC組(

6、簡稱非甲基化組)。分析兩組間DCAT2基因mRNA相對表達量的差異，用以初步探討RCC組織中DACT2基因mRNA相對表達量降低是否與其甲基化的發(fā)生相關(guān)。
　　4應用統(tǒng)計軟件SPSS16.0對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果：1 RCC患者術(shù)后標本中DACT2基因在各組織中發(fā)生甲基化狀態(tài)的分析。根據(jù)MSP后電泳結(jié)果可將RCC患者術(shù)后標本中DACT2基因的甲基化狀態(tài)分為：完全甲基化狀態(tài)，不完全甲基化狀態(tài)和完全非甲基化狀態(tài)。其

7、中完全甲基化狀態(tài)和不完全甲基化狀態(tài)記為甲基化陽性，完全非甲基化狀態(tài)記為甲基化陰性。DACT2基因在59例正常腎組織、59例癌旁組織和59例 RCC組織中的甲基化發(fā)生率分別為5.08％(3/59)，6.78%(4/59)，45.76%(27/59)。三組間存在統(tǒng)計學差異(P<0.05)，RCC組織中 DACT2基因甲基化陽性率明顯高于癌旁組織(P<0.05)及正常組織(P<0.05)。而癌旁組織及正常組織中 DACT2基因甲基化發(fā)生率間比

8、較未見明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)；2 RCC患者術(shù)后標本中DACT2基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)與臨床資料之間的研究。在各組織中DACT2基因啟動子區(qū)甲基化的發(fā)生率與患者的年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、Fuhrman分級(組織學分級)等臨床資料間均未見明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)；3 RCC患者術(shù)后標本中DACT2基因mRNA在各組織中相對表達量的分析。DACT2基因在59例正常組織、59例癌旁組織和59例RCC組織中的相對表達量分別

9、為(0.872±0.022，0.801±0.047，0.427±0.025)。正常及癌旁組織中DACT2基因mRNA的相對表達量均高于RCC組織，且有顯著統(tǒng)計學差異(P<0.05)。正常及癌旁組織中DACT2基因mRNA的相對表達量間未見明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)；4 RCC患者術(shù)后標本中DACT2基因mRNA相對表達量與臨床資料之間的研究。在各組織中 DACT2基因 mRNA相對表達量與患者的年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、組織學

10、分級等臨床資料間均未見明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)；5甲基化組中DACT2基因的mRNA相對表達量顯著低于非甲基化組中 DACT2基因的 mRNA相對表達量(P<0.05)，具有統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論：
　　1.RCC組織中DACT2基因啟動子區(qū)異常甲基化可能與RCC的發(fā)生有關(guān)，但與RCC的臨床進展無關(guān)。
　　2.RCC組織中DACT2基因相對表達量降低可能與RCC的發(fā)生有關(guān)，但與RCC的進展無關(guān)。
　　3.R