中藥鴉膽子中鴉膽苦素A和鴉膽苦素B代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、我國(guó)中藥資源十分豐富，利用中藥治療和預(yù)防疾病已有幾千年的歷史。但部分中藥具有一定的毒性，因使用不當(dāng)引起的中藥中毒事件屢有發(fā)生。傳統(tǒng)中藥鴉膽子，是植物鴉膽子[Brucea javanica(Linnaeus) Merrill]的成熟果實(shí)，又名老鴉膽、鴨蛋子、苦榛子、苦參子等，在我國(guó)主要產(chǎn)于南方沿海熱帶、亞熱帶地區(qū)，國(guó)外主要分布在斯里蘭卡、馬來(lái)群島和澳洲北部。《中藥大辭典》中記載鴉膽子：“清熱解毒，截瘧，止痢，腐蝕贅疣。用于痢疾，瘧疾；外治

2、贅疣，雞眼”?，F(xiàn)代研究表明，鴉膽子還具有抗腫瘤、抗病毒、抗阿米巴的藥理作用，用于白血病、瘧疾、阿米巴痢疾等疾病的治療。鴉膽子油是當(dāng)代治療腫瘤最常用的中藥制劑之一，主要用于治療肺癌及肺癌腦轉(zhuǎn)移、肝癌和各種消化道腫瘤。
　　據(jù)報(bào)道，鴉膽子殼及種子均有毒，其中毒主要由服用方法不當(dāng)（如直接吞服、嚼服等）或過(guò)量服用引起。鴉膽子化學(xué)組成復(fù)雜，毒性主要源于極性較大的苦味成分，該成分為一種劇烈的細(xì)胞原漿毒，不僅對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有很強(qiáng)的抑制作用，對(duì)肝

3、腎實(shí)質(zhì)也有一定的損害，并可引起內(nèi)臟動(dòng)脈顯著擴(kuò)張導(dǎo)致出血。但有關(guān)鴉膽子中毒性成分代謝產(chǎn)物的法醫(yī)學(xué)資料十分匱乏，給鴉膽子中毒的法醫(yī)學(xué)鑒定帶來(lái)了極大的困難。
　　本實(shí)驗(yàn)首次以鴉膽子成熟種子中分離純化得到的鴉膽苦素 A（Bruceine A）和鴉膽苦素B（Bruceine B）為研究對(duì)象，采集大鼠灌胃給藥后膽汁、血漿、尿液和糞便中的代謝產(chǎn)物，運(yùn)用超高效液相色譜四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-qTOF-MS），聯(lián)合PeakView2.2、Me

4、tabolitepilot1.5等軟件對(duì)生物樣本進(jìn)行分析處理和鑒定，建立鴉膽子中有毒單體化合物及其代謝產(chǎn)物的檢驗(yàn)方法，為臨床用藥的安全及中藥中毒案件的法醫(yī)學(xué)鑒定提供一定的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的：建立一種UPLC-qTOF-MS的方法，對(duì)大鼠分別灌胃給藥鴉膽苦素A和鴉膽苦素B后，其血漿、膽汁、尿液和糞便中的代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，并推測(cè)鴉膽苦素A和鴉膽苦素B裂解規(guī)律，為鴉膽子中毒案件的法醫(yī)毒理學(xué)研究提供參考。
　　方法：

5、r>　　1生物樣品的采集：取 SD大鼠（Sprague-Dawley，SD），雄性，24只，體重220±20 g，隨機(jī)分為A、B兩大組，每組再隨機(jī)分4小組（血漿組、膽汁組、尿液和糞便組、對(duì)照組），每小組3只，A組以20 mg/kg鴉膽苦素A的劑量，B組以5 mg/kg鴉膽苦素B的劑量對(duì)大鼠灌胃給藥，對(duì)照組給等體積0.5％羧甲基纖維素鈉（CMC），分別收集給藥后5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 mi

6、n、45 min、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h和24 h的血漿樣品，24 h內(nèi)的膽汁樣品，48 h內(nèi)的尿液樣品和糞便樣品。
　　2生物樣品的預(yù)處理：分別合并所有的膽汁、尿液和血漿樣品，用3倍量的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，32℃減壓蒸干后用甲醇復(fù)溶；合并所有的糞便樣品，通風(fēng)干燥后研磨粉碎，加入50 mL乙酸乙酯超聲萃取3次，每次20 min，過(guò)濾后32℃減壓蒸干，甲醇復(fù)溶。
　　3液-質(zhì)聯(lián)

7、用分析條件：色譜柱為 Phenomenex-Kinetex? C18分析柱（100mm×2.1 mm，2.6μm），流動(dòng)相為甲醇和0.05%乙酸銨水溶液，梯度洗脫；高分辨質(zhì)譜采用電噴霧（electrospray ionization，ESI）源，離子源溫度（turbo spray temperature）：550℃。正離子噴霧電壓（ion spray voltage）為：5500 V霧化氣（Gas1）：55 psi；加熱氣（Gas2）：

8、55 psi。全掃描采集，動(dòng)態(tài)背景扣除（DBS）和信息依賴采集（IDA）觸發(fā)二級(jí)碎片采集，每一循環(huán)采集8個(gè)最強(qiáng)峰的二級(jí)質(zhì)譜圖，運(yùn)行時(shí)間40 min。
　　4代謝產(chǎn)物的分析：運(yùn)用數(shù)據(jù)后處理分析軟件 Metabolitepilot1.5、PeakView2.2和ChemDraw Professional15.0綜合分析數(shù)據(jù)，得到化合物的精確分子質(zhì)量、分子式、一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜圖。對(duì)質(zhì)譜信息解析結(jié)構(gòu)，推斷可能的代謝產(chǎn)物并與Chemspide