Pappa2及IGF信號(hào)通路在正常及髖脫位模型鼠髖關(guān)節(jié)中的表達(dá)研究.pdf

1、目的：
　　探討Pappa2及IGF信號(hào)通路在正常鼠髖關(guān)節(jié)中隨時(shí)間變化表達(dá)情況，并比較它們?cè)谡＜绑y脫位模型鼠髖關(guān)節(jié)中的表達(dá)。
　　方法：
　　(1)將正常Wistar大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)（生前1天，生后7天，生后14天）處死后取髖關(guān)節(jié)，部分標(biāo)本經(jīng)4％多聚甲醛固定、脫鈣、脫水后制成蠟塊，矢狀面連續(xù)切片后進(jìn)行Pappa2、Igfbp5、Igf1R及Igf1的免疫組化染色，其他標(biāo)本提取總蛋白及RNA，進(jìn)行Western Blo

2、t及qRT-PCR實(shí)驗(yàn)，觀察上述指標(biāo)在正常大鼠髖關(guān)節(jié)發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)情況。(2)使用直腿襁褓制作髖脫位模型鼠，即外科固定膠帶捆綁新生的Wistar大鼠雙小腿、雙髖關(guān)節(jié)，呈髖關(guān)節(jié)內(nèi)收伸直、雙下肢并攏位，并固定尾部活動(dòng)，膝關(guān)節(jié)可輕微活動(dòng)。在不同的時(shí)間點(diǎn)（生后7天，生后14天）處死實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠并取其髖關(guān)節(jié)，取材時(shí)通過(guò)解剖觀察，取實(shí)驗(yàn)組中發(fā)生脫位的大鼠髖關(guān)節(jié)及對(duì)照組中正常大鼠髖關(guān)節(jié)，部分標(biāo)本經(jīng)4％多聚甲醛固定、脫鈣、脫水后制成蠟塊，對(duì)照組

3、及實(shí)驗(yàn)組均矢狀面連續(xù)切片，進(jìn)行Pappa2、Igfbp5、Igf1R及Igf1的免疫組化染色，其他標(biāo)本提取總蛋白及RNA，進(jìn)行WesternBlot及qRT-PCR實(shí)驗(yàn)，對(duì)比觀察上述指標(biāo)在正常鼠和髖脫位模型鼠髖關(guān)節(jié)中的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　(1)觀察Pappa2及IGF信號(hào)通路相關(guān)蛋白在正常鼠髖關(guān)節(jié)中隨時(shí)間變化表達(dá)情況的免疫組化結(jié)果，可見(jiàn)上述蛋白在正常鼠髖關(guān)節(jié)中均呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性結(jié)果分布于髖臼軟骨及股骨頭軟骨中，Papp

4、a2及Igf1表達(dá)呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)，Igfbp5及Igf1R表達(dá)呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。Western Blot結(jié)果中Pappa2及IGF信號(hào)通路表達(dá)均呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)，其中Pappa2(P=0.048)、Igf1R(P=0.040)及Igf1(P=0.049)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。qRT-PCR結(jié)果中Pappa2、Igf1R及Igf1表達(dá)呈現(xiàn)先降低后升高的表達(dá)趨勢(shì)，Igf1bp5表達(dá)呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，其中Igf1R(P=

5、0.049)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)觀察Pappa2及IGF信號(hào)通路相關(guān)蛋白在正常鼠及髖脫位模型鼠髖關(guān)節(jié)中表達(dá)情況的免疫組化結(jié)果，可見(jiàn)上述蛋白在正常鼠及髖脫位模型鼠髖關(guān)節(jié)中均呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性結(jié)果分布于髖臼軟骨及股骨頭軟骨中。在生后7天及生后14天實(shí)驗(yàn)組大鼠髖關(guān)節(jié)中，較對(duì)照組而言，Pappa2及Igf1表達(dá)下調(diào)，Igfbp5及Igf1R表達(dá)上調(diào)。Western Blot結(jié)果可見(jiàn)在生后7天實(shí)驗(yàn)組大鼠髖關(guān)節(jié)中，較對(duì)照組而言，Pappa2、I

6、gf1R及Igf1表達(dá)下調(diào)，Igfbp5表達(dá)上調(diào)。在生后14天實(shí)驗(yàn)組大鼠髖關(guān)節(jié)中，Pappa2及Igf1表達(dá)下調(diào)，Igfbp5及Igf1R表達(dá)上調(diào)，其中Igf1R，0.62±0.09（正常組）vs0.89±0.11（實(shí)驗(yàn)組），P=0.030; Igf1，1.14±0.12（正常組）vs0.73±0.13（實(shí)驗(yàn)組），P=0.017。qRT-PCR結(jié)果可見(jiàn)生后7天實(shí)驗(yàn)組大鼠髖關(guān)節(jié)中，較對(duì)照組而言，Pappa2、Igf1R及Ig f1表達(dá)下調(diào)