滋陰清肝方對雌性中樞性性早熟大鼠褪黑素及受體的影響.pdf

1、目的:
　　從中醫(yī)基礎(chǔ)理論和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度分析并總結(jié)中樞性性早熟的病因病機(jī)、治則治法。本文建立雌性大鼠中樞性性早熟（central precocious puberty,CPP）模型，通過觀察滋陰清肝方對雌性 CPP大鼠性發(fā)育、褪黑素及受體、體質(zhì)量等相關(guān)指標(biāo)的影響，探討褪黑素及其受體與性早熟之間的關(guān)系；了解褪黑素和受體表達(dá)及體質(zhì)量在滋陰清肝方治療性早熟中的作用，進(jìn)一步明確滋陰清肝方的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1、理論研

2、究
　　系統(tǒng)回顧古今文獻(xiàn)，了解中西醫(yī)理論對 CPP的病因病機(jī)、治則治法的認(rèn)識，為實驗研究提供理論依據(jù)。
　　2、實驗研究
　　SD雌性大鼠共32只，出生后隨機(jī)分為正常組、模型組、西藥組、中藥組，每組8只。大鼠5日齡時，除正常組外，其余3組大鼠皮下注射300μg達(dá)那唑建立大鼠 CPP模型。15日齡時，西藥組、中藥組大鼠分別給予亮丙瑞林(100μg/kg)和滋陰清肝方(3.2g/ml)進(jìn)行干預(yù)。當(dāng)模型組陰門開啟動物超過半數(shù)

3、（＞50％）時終止實驗。
　　自造模之日（5日齡）起，每日通過肉眼觀察各組大鼠陰門開啟情況并記錄開啟時的日齡（vaginal opening，VO）；陰道涂片法觀察第1個發(fā)情間期的出現(xiàn)并記錄出現(xiàn)時的日齡（first diestrus，D1）；每4天監(jiān)測各組大鼠體質(zhì)量。實驗結(jié)束時麻醉后處死大鼠，取卵巢、子宮稱重計算臟器系數(shù)；制作常規(guī)組織病理切片觀察子宮、卵巢的組織形態(tài)并計算子宮壁厚度和卵巢黃體個數(shù)；檢測血清中的褪黑素（MT）、促黃體

4、生成素（LH）和骨鈣素（BGP）水平；通過熒光實時定量PCR法檢測下丘腦促性腺激素釋放激素(GnRH) mRNA的表達(dá)；檢測下丘腦褪黑素受體MT1、MT2 mRNA的表達(dá)。
　　統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，組間數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x±s)表示，以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、理論研究
　　回顧古今研究 CPP的相關(guān)文獻(xiàn)，對 CP

5、P的病因病機(jī)、治則治法的認(rèn)識均認(rèn)為肝脾腎為發(fā)病的關(guān)鍵?，F(xiàn)代中醫(yī)認(rèn)為性早熟的病機(jī)主要有陰虛火旺、肝郁化火、脾虛痰結(jié)型3個常見證型。而在長江以南地區(qū)，性早熟的證型以陰虛火旺合并肝郁化火多見。滋陰清肝方由知母，黃柏，夏枯草，白芍，生地，丹皮組成，是總結(jié)導(dǎo)師向楠教授及?？?0余年治療 ICPP經(jīng)驗的基礎(chǔ)方。在臨床觀察和動物實驗中都已初步證實，滋陰清肝方對 CPP有較好的治療效果。
　　2、實驗研究
　?。?）與正常組比較，模型組大鼠

6、31日齡陰門開啟日齡明顯提前、子宮系數(shù)增加(P＜0.05)，卵巢系數(shù)明顯增加(P＜0.01)，子宮壁厚度、卵巢黃體數(shù)均增加(P＜0.05， P＜0.01)，血清 LH， BGP明顯上升(P＜0.01)，下丘腦 GnRHmRNA表達(dá)水平升高(P＜0.01)，病理切片上可見子宮卵巢組織體積增大，夜間血清MT降低(P＜0.01)，下丘腦MT受體MT1 mRNA的表達(dá)上升(P＜0.01)。
　?。?）與模型組比較，中藥組大鼠的陰門開啟日齡

7、延遲，子宮系數(shù)降低(P＜0.05)，卵巢系數(shù)降低(P＜0.01)，子宮壁厚度和黃體生成數(shù)降低(P＜0.05，P＜0.01)，LH和BGP降低(P＜0.05)，夜間血清MT升高(P＜0.05)，并且下丘腦GnRH mRNA表達(dá)水平下降(P＜0.05)，下丘腦MT受體MT1 mRNA的表達(dá)上升(P＜0.05)，病理切片上可見子宮卵巢組織體積縮小。
　　（3）與正常組、模型組、西藥組比較，中藥組組大鼠自25日齡（滋陰清肝方灌胃10日后）

8、至實驗結(jié)束，體質(zhì)量明顯降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　?。?）在中醫(yī)基礎(chǔ)理論指導(dǎo)下，應(yīng)用滋陰清肝方治療 CPP既有理論基礎(chǔ)，也有實驗研究支持。
　?。?）造模后大鼠出現(xiàn)性發(fā)育提前，性腺組織增大，性激素水平升高，骨發(fā)育亢進(jìn)，GnRH mRNA表達(dá)水平升高的特點；同時夜間血清 MT降低，下丘腦MT受體MT1 mRNA的表達(dá)下降。提示雌性CPP大鼠造模成功，MT及其受體與性早熟密切相關(guān)。
　　（3）滋陰清肝方對雌