海洋拮抗菌及捕食細(xì)菌的篩選及兩株拮抗菌的初步研究.pdf

1、據(jù)報(bào)道，“超級(jí)細(xì)菌”每年導(dǎo)致全球約70萬(wàn)人死亡，23萬(wàn)新生嬰兒夭折，至2050年，死亡人數(shù)可能超過(guò)1000萬(wàn)。耐藥病原菌的不斷增加及擴(kuò)散成為了一個(gè)不容忽視的問(wèn)題，但是新型抗生素的發(fā)現(xiàn)步伐日趨減慢，因此新型抗生素的挖掘顯得尤為重要。本論文通過(guò)威海金海灘、小石島和雙島灣近海三個(gè)地點(diǎn)的樣品富集，利用稀釋涂布的方法分離得到可培養(yǎng)海洋微生物，然后采用點(diǎn)種法篩選得到118株海洋拮抗菌和4株捕食細(xì)菌。
　　本論文從篩選出的海洋拮抗菌中挑選了兩株

2、編號(hào)分別為BXN2401和BXO402的拮抗菌株進(jìn)行了初步研究，主要包括表型特征的分析，生理生化特征的鑒定，針對(duì)14株病原指示菌的抑菌譜的繪制，發(fā)酵條件的初步優(yōu)化，基因組信息分析及其拮抗基因的預(yù)測(cè)等。通過(guò)16S rDNA序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)目前已有效發(fā)表的細(xì)菌物種中未定德研所菌(Desemzia incerta DSM20581T)與BXN2401擁有最高相似度(99.78％)，運(yùn)動(dòng)魯杰氏菌(Ruegeria mobilis DSM23403T

3、)與BXO402擁有最高相似度(99.35％)。通過(guò)抑菌譜的探索實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)菌株BXN2401對(duì)12株指示菌有較廣泛的抑菌效果，通過(guò)觀察其抑菌圈大小可以初步判斷菌株BXN2401對(duì) Vibrio aestuarianus ATCC35048T， Vibriodiazotrophicus ATCC33466T, Vibrio gazogenes ATCC29988T, Vibrioparahaemolyticus ATCC17802T,Vib

4、rio natriegens ATCC14048T,Pseudomonasaeruginosa ATCC27853,Staphylococcus aureus ATCC25923, Staphylococcusaureus ATCC29213, Acinetobacter baumannii ATCC19606T和ArcobacterachromusNP18T都有較強(qiáng)的拮抗活性，菌株BXO402對(duì)Klebsiella pneumonia

5、eATCC700603、Escherichia coli ATCC25922和Staphylococcus aureus ATCC25923有較強(qiáng)的拮抗活性。然而通過(guò)兩株菌的發(fā)酵條件的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，并未篩選出適合菌株BXO402的發(fā)酵培養(yǎng)基配方。通過(guò)對(duì)菌株BXN2401和BXO402基因組序列的生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，BXN2401有6個(gè)基因與產(chǎn)生抗生素相關(guān)的基因被比對(duì)、注釋出來(lái)，其中有兩個(gè)基因與產(chǎn)生青霉素和頭孢菌素相關(guān)，有3個(gè)基因與產(chǎn)生鏈霉素

6、相關(guān)，有一個(gè)基因與產(chǎn)生丁苷菌素和新霉素相關(guān);BXO402有17個(gè)基因與產(chǎn)生抗生素相關(guān)的基因被比對(duì)、注釋出來(lái)，其中有3個(gè)基因與產(chǎn)生青霉素和頭孢菌素相關(guān)，有9個(gè)基因與產(chǎn)生鏈霉素相關(guān)，有一個(gè)基因與產(chǎn)生丁苷菌素和新霉素相關(guān)，有4個(gè)基因與產(chǎn)生新生霉素相關(guān)。
　　本論文選取了12株常見(jiàn)病原菌標(biāo)準(zhǔn)菌株和兩株本實(shí)驗(yàn)室正在鑒定的2株潛在病原菌作為被捕食細(xì)菌，初步探究了4株捕食細(xì)菌對(duì)這些菌株的捕食作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)4株捕食細(xì)菌對(duì)本實(shí)驗(yàn)中的14株指示菌有著

7、相似的捕食譜，并且四株捕食細(xì)菌對(duì)本實(shí)驗(yàn)中的革蘭氏陰性和革蘭氏陽(yáng)性指示菌都有捕食現(xiàn)象。
　　為了豐富海洋微生物資源的數(shù)據(jù)，本論文對(duì)本實(shí)驗(yàn)室從不同的樣品中篩選出來(lái)的三株潛在海洋新物種進(jìn)行了多相分類鑒定。
　　菌株FA150T分離自中國(guó)威海雙島灣近海，革蘭氏陰性菌，兼性厭氧。氧化酶和硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，過(guò)氧化氫酶實(shí)驗(yàn)陰性。菌株FA150T的主要脂肪酸為Summed Feature3(C16:1ω7c and/or iso-C15:

8、02-OH)(42.56％),C18:1ω7c(12.51％)，C16:0(10.43％)，C12:0(9.75％)和C14:0(9.11％)，主要呼吸醌為MK-6，主要極性脂為磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)和磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol，PG)，基因組DNA G+C含量為31.34 mol％。通過(guò)多相分類鑒定發(fā)現(xiàn)菌株FA150T為弓形菌屬（Arcobacter）的一個(gè)新物

9、種，命名為乳色弓形菌（Arcobacter lacteus sp.nov），模式菌株為FA150T(=KCTC42593T=MCCC1H00108T)。
　　菌株NP18T分離自榮成某海參養(yǎng)殖池，革蘭氏陰性菌，兼性厭氧。氧化酶、過(guò)氧化氫酶和硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。菌株NP18T的主要脂肪酸為SummedFeature3(C16:1ω7c and/or iso-C15:02-OH)(44.01％),C16:0(19.59％),C14:0

10、(11.47％)，C18:1ω7c(9.85％)和C12:0(8.57％)，主要呼吸醌為MK-6，主要極性脂為磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol，PG)和雙磷脂酰甘油（Diphosphatidylglycerol，DPG），基因組DNA G+C含量為29.54 mol％。通過(guò)多相分類鑒定發(fā)現(xiàn)菌株NP18T為弓形菌屬(Arcobacter)的一個(gè)新物

11、種，命名為透明弓形菌(Arcobacter achromussp.nov.)，模式菌株為NP18T(=KCTC42592T=MCCC1H00109T)。
　　菌株SS2-24T分離自中國(guó)威海某海參養(yǎng)殖池，革蘭氏陰性菌，兼性厭氧。氧化酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，過(guò)氧化氫酶和硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)陰性。菌株SS2-24T的主要脂肪酸為Summed Feature3(iso-C15:02-OH and/or C16:1ω7c)(25.49％),C16:0 Na

12、lcohol(13.50％), C16:0(12.46％),C17:010-methyl(11.07％), C18:1ω7c(6.34％)和C17:1ω8c(5.93％)，主要呼吸醌為Q-8，主要極性脂為磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine，PE）和磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol，PG)，基因組DNA G+C含量為51.09 mol％。通過(guò)多相分類鑒定發(fā)現(xiàn)菌株SS2-24T為湖菌屬（Lac