TSLP通過(guò)JAK1-AKT信號(hào)通路促進(jìn)腰椎間盤(pán)突出重吸收的機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)TSLP通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)通路介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，從而介導(dǎo)相關(guān)因子的表達(dá)，抑制髓核細(xì)胞凋亡并且對(duì)突出或者脫出的腰椎髓核組織進(jìn)行重新吸收，并以此為根基重新審視炎癥反應(yīng)這把雙刃劍，并加以利用，這可能為延緩椎間盤(pán)退變提供新的思路。
　　方法：1.取材均來(lái)自于8周齡雄性SD大鼠，分屬于各實(shí)驗(yàn)部分，取其間盤(pán)，去除纖維環(huán)和軟骨板進(jìn)行組織培養(yǎng)。將所培養(yǎng)的間盤(pán)組織分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組加入TSLP，同時(shí)將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，在不

2、同的時(shí)間段分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的間盤(pán)組織進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定，在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm處，測(cè)定各孔吸光度值。記錄MCP-1、MMP3、IL-6因子的表達(dá)情況。2.同樣方法培養(yǎng)雄性SD大鼠，取培養(yǎng)完好的間盤(pán)組織分為對(duì)照組、TSLP組及TSLP+JAK1抑制劑組，在抑制組中加入免疫抑制劑同時(shí)進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，在不同的時(shí)間段分別對(duì)各組間盤(pán)組織進(jìn)行蛋白的表達(dá)測(cè)定并曝光顯影。而后取培養(yǎng)結(jié)束后的大鼠髓核組織，用4％多聚甲醛固定

3、組織，脫水處理后，石蠟包被，進(jìn)行組織切片，厚度5μM，利用免疫組織化學(xué)染色法對(duì)切片進(jìn)行處理后，用光學(xué)顯微鏡觀察陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)及分布并記錄以完成統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析。同時(shí)對(duì)該實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的MCP-1、MMP3、IL-6表達(dá)進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定。3.以相同的方式方法對(duì)準(zhǔn)備好的SD大鼠椎間組織進(jìn)行對(duì)照組、TSLP組及TSLP+Akt抑制劑（LY294002）組在不同的時(shí)間段p-Akt、Akt、p-NFкB、NF-кB和β-actin的W

4、estern blot法測(cè)定表達(dá)，大鼠髓核組織培養(yǎng)結(jié)束后，用4%多聚甲醛固定組織，脫水處理后，石蠟包被，進(jìn)行組織切片，厚度5μM，組織切片用抗p-NFкB抗體或正常山羊血清孵育.利用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)磷酸化JAK1、Akt、NF-kB的水平，光學(xué)顯微鏡下觀察陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)及分布，同時(shí)利用相同方法對(duì)該實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的MCP-1、MMP3、IL-6表達(dá)進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定。
　　結(jié)論：在腰椎間盤(pán)突出重吸收過(guò)程TSLP作