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文檔簡介
1、目的:通過建立HepG2胰島素抵抗模型(Hep G2-IR),比較肌肉肌醇(myo-inositol,MI)、D-手性肌醇(D-chirol-inositol,DCI)及二者合用對HepG2-IR細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響,并探討其作用的可能機(jī)制。
方法:
1.CCK-8法檢測不同濃度(0、25、35、45、55、65mmol/L)的葡萄糖對HepG2細(xì)胞增殖活性的影響,不同濃度(0、0.25、0.5、1、2、4、8、1
2、6、32mmo l/L)的MI、DCI及二者合用分別對Hep G2細(xì)胞增殖活性的影響,以確定其在實(shí)驗(yàn)中的作用劑量范圍。
2.濃度為55mmol/L的葡萄糖持續(xù)作用 HepG2細(xì)胞24h后,1nmol/L胰島素刺激誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞15~25min,建立胰島素抵抗細(xì)胞模型;通過葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)檢測對照組與模型組葡萄糖消耗量,以鑒定模型是否成立。
3.不同濃度(0.125、0.25、0.5mmol/L)
3、的MI、DCI及二者合用分別作用HepG2-IR細(xì)胞,GOD-POD法檢測它們對葡萄糖消耗量的影響。Western-blot法檢測MI、DCI及二者合用對HepG2-IR細(xì)胞PI3K、pAkt、Akt蛋白表達(dá)的影響。
結(jié)果:
1.與空白對照組相比,葡萄糖在35~55mmo l/L濃度時(shí),對HepG2細(xì)胞增殖活性無影響,而葡萄糖在濃度為65mmo l/L時(shí),對HepG2細(xì)胞增殖活性有顯著的抑制作用(P<0.05);0~
4、0.5mmol/L濃度的MI、DCI對HepG2細(xì)胞增殖活性無影響,而1~32mmol/L濃度的MI、DCI對HepG2細(xì)胞增殖活性有顯著的抑制作用(P<0.01),且隨MI、DCI濃度的增加,細(xì)胞增殖活性有逐漸降低的趨勢;0~1mmol/L濃度的MI與DCI合用對HepG2細(xì)胞增殖活性無影響,而2~32mmol/L濃度的MI與DCI合用對Hep G2細(xì)胞增殖活性有顯著的抑制作用(P<0.01),且隨MI與DCI合用濃度的增加,細(xì)胞增殖
5、活性有逐漸降低的趨勢。
2.GOD-POD法檢測結(jié)果表明,與正常對照組相比,濃度為55mmol/L的葡萄糖持續(xù)作用HepG2細(xì)胞24h,且1nmol/L胰島素刺激15-25min后,被誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗量顯著降低(P<0.01),表明成功建立了HepG2-IR細(xì)胞模型。
3.GOD-POD法檢測顯示,與模型對照組相比,MI、DCI及二者合用組都可增加HepG2-IR細(xì)胞葡萄糖消耗量(P<0.05),且每個(gè)
6、組隨著干預(yù)濃度增加,葡萄糖消耗量有逐漸上升的趨勢,在相同濃度下,合用組葡萄糖消耗量增加最顯著(P<0.05)。
4.Western-blot分析顯示,與模型對照組相比,MI、DCI及二者合用組可增加HepG2-IR細(xì)胞PI3K蛋白表達(dá)及pAkt/Akt蛋白表達(dá)水平的比值,且每個(gè)組隨著干預(yù)濃度增加,蛋白表達(dá)及蛋白表達(dá)水平的比值有逐漸上升的趨勢,在相同濃度下,合用組提高的PI3K蛋白表達(dá)及pAkt/Akt蛋白表達(dá)水平的比值最顯著(
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