血清循環(huán)DNA在大腸癌診斷和療效評價(jià)方面的應(yīng)用研究.pdf

1、背景：大腸癌（colorectal cancer，CRC）是常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率分別居于男、女性惡性腫瘤的第3位和第2位。新發(fā)病例數(shù)和死亡病例數(shù)呈逐年上升趨勢。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2012年兩項(xiàng)數(shù)字達(dá)到了140萬和69.39萬。由于早期缺乏特異性癥狀，超過半數(shù)患者就診時(shí)已屬中晚期，即使接受了手術(shù)治療，仍有較高的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。因此早期診斷和監(jiān)測復(fù)發(fā)對大腸癌的治療至關(guān)重要。
　　循環(huán)DNA（Circulating DNA）是一種存在于血漿、

2、腦脊液及滑液等體液中的細(xì)胞外DNA，主要來源于細(xì)胞的凋亡和壞死。據(jù)估算，一個重量100g的腫瘤，每天大約3×1010個細(xì)胞的DNA進(jìn)入血液循環(huán)。血液循環(huán)中的癌細(xì)胞和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞同樣釋放循環(huán)DNA。檢測血漿或血清中的循環(huán)DNA猶如“液體活檢（Liquid biopsy）”，不僅可以通過“量”的多少估算腫瘤負(fù)荷、評價(jià)治療效果，還可以通過檢測遺傳學(xué)（如基因突變等）和表觀遺傳學(xué)（基因甲基化、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性、雜合性缺失LOH、miRNAs）的

3、改變判斷良惡性和篩選藥物靶標(biāo)。更重要的是，循環(huán)DNA的檢測簡便、經(jīng)濟(jì)，重復(fù)性好。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)通過比較血清循環(huán)DNA含量及完整性（DNA integrity index）在大腸癌患者、腸道良性病變患者及健康人的區(qū)別的差別來判斷二者是否在大腸癌的診斷方面具有價(jià)值，并且研究二者在評估手術(shù)大腸癌患者和化療大腸癌患者治療價(jià)值方面的價(jià)值。
　　方法：收集山東省腫瘤醫(yī)院自2014年6月-2015年6月收治的手術(shù)大腸癌患者血清標(biāo)本11

4、2例（術(shù)前3天，術(shù)后7天，術(shù)后14天）；化療大腸癌患者血清標(biāo)本36例（第1周期化療前，第3周期化療前）；腸道良性疾病患者血清標(biāo)本46例；健康人血清標(biāo)本41例。以LINE1基因?yàn)閿U(kuò)增引物，檢測血清標(biāo)本循環(huán)DNA的含量及完整性指數(shù)（完整性的計(jì)算按照如下公式計(jì)算：完整性指數(shù)=長片段DNA含量/短片段DNA含量）。療效評價(jià)按照2009年美國國立癌癥研究所實(shí)體瘤客觀療效評定標(biāo)準(zhǔn)修訂版RECIST1.1進(jìn)行評價(jià)。采用SPSS17.0計(jì)算機(jī)醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)分

5、析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，全部檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)， P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.循環(huán)DNA（Circulating DNA）含量、完整性指數(shù)（DII）與分化程度、分期和有無轉(zhuǎn)移等臨床因素有關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位和PS評分無關(guān)(P>0.05)。CEA和CA199與分期和有無轉(zhuǎn)移因素相關(guān)（P<0.05），和性別、年齡、腫瘤部位、分化程度和PS評分無關(guān)(P>0.05)。
　　2.循環(huán)DNA（Circ

6、ulating DNA）含量、CEA和CA199在大腸癌患者、腸道良性疾病患者和健康人之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），三組人群的完整性指數(shù)（DII）則沒有明顯差異(P>0.05)。
　　3.循環(huán)DNA含量、CEA和CA199區(qū)分癌癥患者和非癌癥人群的AUC分別為是0.71、0.67和0.69。
　　4.循環(huán)DNA含量、CEA和CA199診斷大腸癌的敏感性分別為62.21％、59.46%和43.92%；特異性分別為7

7、9.31%、68.97%和96.55%。
　　5.手術(shù)大腸癌患者術(shù)后7天循環(huán)DNA含量較術(shù)前3天增高（P<0.05），術(shù)后14天較術(shù)前3天和術(shù)后7天降低（P<0.05）；術(shù)后7天完整性指數(shù)（DII）較術(shù)前3天增大（P<0.05），術(shù)后14天較術(shù)后7天降低（P<0.05），但高于術(shù)前3天（P<0.05）；術(shù)后14天循環(huán)DNA含量和完整性指數(shù)（DII）仍高于健康人水平。
　　6. CR+PR患者化療后循環(huán)DNA含量與化療前相比降

8、低（P<0.05），SD患者和PD患者化療后較化療前升高（P均<0.05）。3組患者完整性指數(shù)（DII）化療前后的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05）。CR+PR組和SD組患者化療前后CEA、CA199含量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05）；而PD組患者化療后的CEA和CA199含量較化療前升高（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.循環(huán)DNA含量、完整性指數(shù)（DII）、CEA和CA199與大腸癌患者的分期和轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示檢測標(biāo)志物水平

9、有助于評估疾病狀態(tài)。
　　2.循環(huán)DNA含量、CEA和CA199具有區(qū)分大腸癌患者、腸道良性疾病患者和健康人群的潛在應(yīng)用價(jià)值，完整性指數(shù)（DII）則不具備這種價(jià)值。
　　3.循環(huán)DNA含量、CEA和CA199在區(qū)分癌癥患者和非癌癥人群方面具有一定的價(jià)值，其中循環(huán)DNA含量的價(jià)值最大。
　　4.循環(huán)DNA含量具有最高的診斷敏感性，CA199具有最高的診斷特異性。
　　5.循環(huán)DNA含量、完整性指數(shù)（DII）在術(shù)后呈