版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:
腦梗死是神經(jīng)內(nèi)科常見病、多發(fā)病,病死率及致殘率很高。早期溶栓是急性腦梗死有效的治療方法,但是溶栓治療嚴(yán)格的時間窗使絕大多數(shù)患者很難在規(guī)定的時間內(nèi)到醫(yī)院接受治療。腦梗死后神經(jīng)損傷的病理生理機(jī)制是比較復(fù)雜的級聯(lián)反應(yīng),主要包括興奮性氨基酸毒性、氧化應(yīng)激、炎癥和凋亡等。缺氧時,谷氨酸興奮毒作用的關(guān)鍵病理過程之一是鈣離子內(nèi)流引起鈣超載。鈣超載導(dǎo)致一系列鈣依賴性酶被激活,致使自由基產(chǎn)生增加。從而引起線粒體受損、脂質(zhì)過氧化、ATP匱
2、乏、ROS產(chǎn)生、核酸斷裂等,最終導(dǎo)致神經(jīng)元死亡。線粒體鈣濃度與線粒體能量代謝、膜通透性密切相關(guān),也會對胞漿鈣信號進(jìn)行修飾進(jìn)而影響細(xì)胞功能。線粒體鈣離子單向轉(zhuǎn)運(yùn)體(Mitochondrial calcium uniporter,MCU)是新近鑒定出的線粒體內(nèi)膜上參與線粒體鈣攝取的重要結(jié)構(gòu)。MICU1(Mitochondrial calcium uptake1)是MCU的調(diào)節(jié)蛋白,其對MCU的作用是激活還是抑制,尚且存在爭議。由此看來,這種
3、高度復(fù)雜而精確的調(diào)節(jié)作用仍有待深入研究。新近研究表明MCU參與神經(jīng)細(xì)胞谷氨酸興奮毒,抑制MCU可減少線粒體鈣攝取,保護(hù)線粒體功能從而減少神經(jīng)元死亡。因此我們思考MCU、MICU1與腦梗死的相關(guān)性,能否通過干預(yù)MICU1與MCU的表達(dá)來扼制鈣超載從而挽救腦梗死中受損細(xì)胞?這一新的思路研究期望提供一個腦梗死治療的新靶點(diǎn)。
方法:
1、采用成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠,隨機(jī)分為正常對照組(control)、
4、假手術(shù)組(sham)、大腦中動脈栓塞(middle cerebral arteryocclusion,MCAO)組(分為3h、6h、12h、24h、48h、72h六個時間點(diǎn)),應(yīng)用Longa等的線栓法建立MCAO大鼠模型。術(shù)后麻醉清醒后對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分。在上述不同時間點(diǎn)將動物斷頭處死,用2%2,3,5-三苯基四唑氮紅(triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色法測算腦梗死體積,用蛋白質(zhì)印跡法(Wes
5、tern Blot)、實(shí)時定量熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time reverse transcription-quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR)和免疫組化來觀察MCU、MICU1、cleaved-caspase3的表達(dá)情況,用透射電鏡觀察細(xì)胞及線粒體超微結(jié)構(gòu)變化,用流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測線粒體功能。
2、采用成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠,隨機(jī)分為正常
6、對照組(control)、假手術(shù)組(sham)、MCAO12h組、尤瑞克林+MCAO組(尤瑞克林0.00875PAN/kg+MCAO)。給藥組動物梗死后尾靜脈注射尤瑞克林0.00875PAN/kg,正常對照組、假手術(shù)組和MCAO組給予等容量生理鹽水。術(shù)后麻醉清醒后對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分。梗死后12h大鼠斷頭處死,TTC染色法測算腦梗死體積,用Westem Blot來觀察MCU及凋亡蛋白cleaved-caspase3的表達(dá)情況。
7、 結(jié)果:
1、MCAO組各個時間點(diǎn)可見左側(cè)肢體偏癱癥狀,神經(jīng)功能評分升高(P<0.05)。TTC染色結(jié)果顯示正常對照組和假手術(shù)組大鼠腦組織無白色梗死灶;MCAO組可見右側(cè)大腦半球大面積白色梗死灶。
2、Western Blot顯示腦梗死6小時MCU、MICU1呈上升趨勢,至梗死后12小時,MCU、MICU1表達(dá)量達(dá)高峰,Cleaved-caspase3表達(dá)在腦梗死后3、6、12小時升高顯著(P<0.05);免疫組化
8、可見缺血6、12小時后,MCU、MICU1陽性細(xì)胞數(shù)較正常對照組及假手術(shù)組明顯增多Realtime-qPCR顯示MCU在mRNA水平的表達(dá)從梗死后6小時開始升高,至12小時達(dá)到高峰(P<0.05),MICU1在mRNA水平的表達(dá)在梗死后6-12小時較正常對照及假手術(shù)組升高顯著(P<0.05)。
3、電鏡下正常對照組和假手術(shù)組細(xì)胞形態(tài)正常,神經(jīng)元無水腫,細(xì)胞核核仁明顯,核膜完整,胞漿線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器完整清晰可見。MCAO后
9、3小時可見腦皮層缺血區(qū)神經(jīng)元胞體腫脹,胞膜完整,線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,核膜模糊,核仁染色質(zhì)輕度溶解;MCAO后12小時可見胞漿水腫明顯,胞膜溶解,出現(xiàn)大量空泡,線粒體水腫明顯,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)溶解,完整細(xì)胞器少見,核膜溶解。有的神經(jīng)元出現(xiàn)凋亡,表現(xiàn)為核染色質(zhì)邊集,胞體變形,胞核固縮。
4、流式細(xì)胞技術(shù)檢測顯示大鼠腦梗死后12-24小時較正常對照組及假手術(shù)組線粒體膜電位降低顯著(P<0.05)。
5、尤瑞克林+MCAO組與MCAO
10、12h組相比神經(jīng)功能評分改善顯著(P<0.05);TTC染色顯示與MCAO12h組比較,尤瑞克林+MCAO組梗死體積明顯縮小(P<0.05);Western Blot可見與假手術(shù)組相比,MCAO12h組MCU表達(dá)量顯著增高(P<0.05),尤瑞克林+MCAO組MCU表達(dá)量較MCAO組顯著降低(P<0.05),尤瑞克林+MCAO組Cleaved-caspase3表達(dá)量較MCAO組及正常對照均顯著降低(P<0.05)。
結(jié)論:
11、r> 腦梗死后腦組織中MCU、MICU1蛋白及mRNA水平表達(dá)顯著增高,同時期cleaved-caspase3表達(dá)增高,細(xì)胞凋亡增多,線粒體膜電位降低,表明MCU、MICU1協(xié)同作用促進(jìn)線粒體鈣攝取,降低線粒體膜電位,導(dǎo)致線粒體功能損傷,引起鈣超載,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,在大鼠腦梗死引起神經(jīng)細(xì)胞損傷的病理生理過程中發(fā)揮著重要的作用,是腦梗死后神經(jīng)損傷的機(jī)制之一。
尤瑞克林能改善神經(jīng)功能缺損狀況,減小腦梗死體積。尤瑞克林神經(jīng)保護(hù)機(jī)
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 褪黑素-MICU1在心肌肥厚中的作用及機(jī)制研究.pdf
- MICU1下調(diào)介導(dǎo)的線粒體鈣攝取障礙在糖尿病心肌病發(fā)生中的作用及機(jī)制.pdf
- VEGF基因轉(zhuǎn)染MSCs移植對腦梗死大鼠模型的治療作用及機(jī)制研究.pdf
- 逐痰通絡(luò)方對急性腦梗死大鼠的作用及可能機(jī)制.pdf
- 水通道蛋白1在大鼠心肌梗死模型疼痛中的作用.pdf
- 線粒體鈣離子攝取中關(guān)鍵蛋白micu1的結(jié)構(gòu)與功能研究
- TLR4在大鼠腦梗死組織中的動態(tài)表達(dá)及OMT抗炎機(jī)制的研究.pdf
- TLR2在腦梗死大鼠腦組織中的動態(tài)表達(dá)及OMT腦保護(hù)機(jī)制的研究.pdf
- 中醫(yī)針灸療法在腦梗死治療中的作用
- 祛瘀生新法對腦梗死大鼠治療性血管新生作用及機(jī)制研究.pdf
- TORC1、phospho-CREB和BDNF在實(shí)驗(yàn)性大鼠腦梗死模型中的動態(tài)表達(dá)及丹參酮ⅡA腦保護(hù)作用的研究.pdf
- TXA2R基因多態(tài)性在腦梗死發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf
- 雌激素在頭痛模型大鼠中的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制.pdf
- 大鼠急性腦梗死模型制作及7.0tmri成像研究
- 心磷脂抗體在中青年腦梗死病因中的作用.pdf
- 白花丹參葉對大鼠局灶性腦梗死的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf
- 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植對腦梗死大鼠的保護(hù)作用及抗炎機(jī)制.pdf
- 龍蛭湯促氣虛血瘀證急性腦梗死大鼠血管新生的作用及機(jī)制研究.pdf
- TLR4在腦梗死炎性損傷中的作用研究.pdf
- 腦梗死氣虛血瘀證大鼠模型的建立與評價.pdf
評論
0/150
提交評論