地奧司明預(yù)處理對(duì)家兔移植供心的保護(hù)作用.pdf

1、背景：
　　當(dāng)今器官移植技術(shù)水平愈趨成熟，許多心臟終末期患者得到救治。心臟移植過(guò)程中，由于心臟經(jīng)歷了停跳至復(fù)跳這一過(guò)程，不可避免遭受心肌缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusioninjury,IRI)。心臟外科手術(shù)中，心肌細(xì)胞損傷主要源于心臟缺血再灌注損傷，其主要損傷機(jī)制有：氧自由基損傷、細(xì)胞內(nèi)鈣超載和線粒體損傷、能量代謝障礙、炎癥反應(yīng)、血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙、心肌細(xì)胞凋亡等。以上病理改變將使心肌細(xì)胞出現(xiàn)損傷甚至死亡，

2、導(dǎo)致肌細(xì)胞水腫、心律失常、心臟收縮功能障礙等病理改變，從而影響心臟外科手術(shù)的效果和術(shù)后恢復(fù)。
　　1993年Yellon將心臟缺血預(yù)處理（ischemicpreconditioning,IPC)首次應(yīng)用于臨床，并獲得人體內(nèi)心臟IPC效應(yīng)的直接證據(jù)。但施行IPC過(guò)程中對(duì)機(jī)體不可避免的造成損傷、升主動(dòng)脈血栓形成、延長(zhǎng)手術(shù)時(shí)間、缺血預(yù)處理的時(shí)間和次數(shù)以及再灌注的時(shí)間不明確等因素，導(dǎo)致IPC臨床上應(yīng)用受到限制，由此許多學(xué)者提出手術(shù)前使用藥

3、物來(lái)激發(fā)機(jī)體內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制而達(dá)到缺血預(yù)處理效果，其中有藥物預(yù)處理（pharmacologicpreconditioning,PPC）?，F(xiàn)已經(jīng)證實(shí)的具有心臟保護(hù)的藥物包括單磷酰酯A、KATPC開(kāi)放劑、吸入性麻醉藥和阿片類麻醉藥、腺苷、改善血液回流藥物等。
　　目前研究表明，改善血液回流藥物可以通過(guò)減輕心臟后負(fù)荷、保護(hù)血管內(nèi)皮、減輕氧自由基損傷、抑制炎癥反應(yīng)、抗凋亡、降低血液粘度、抑制心律失常等作用來(lái)達(dá)到心肌保護(hù)效果。地奧司明在抗器官

4、（腎、腦）IRI中具有明確作用，但其在心肌IRI中的保護(hù)作用還未見(jiàn)報(bào)道。本課題擬通過(guò)設(shè)立新西蘭兔地奧司明藥物預(yù)處理組和地奧司明聯(lián)合超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）抑制劑二乙基二硫代氨基甲酸鈉(DDTC)藥物預(yù)處理組，和無(wú)預(yù)處理的空白組對(duì)照組，再對(duì)組和組之間的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析，對(duì)地奧司明預(yù)處理在心臟移植中對(duì)供心的保護(hù)作用及機(jī)制進(jìn)行研究分析。
　　目的：
　　探討地奧司明預(yù)處理對(duì)新西蘭兔移植供

5、心的保護(hù)作用機(jī)理。
　　方法：
　　成年的健康新西蘭大白兔36只，雌雄不限，體重2.5±0.5kg（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）。予以編號(hào)后按簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣方法分為1，2，3組，每組12只，第一組設(shè)定為心肌缺血再灌注組，第二組設(shè)定為地奧司明預(yù)處理組，第三組設(shè)定為地奧司明+DDTC預(yù)處理組，每組供體受體隨機(jī)配對(duì)6對(duì)。
　　供心摘?。河诠w新西蘭兔腹腔注射50mg/kg苯巴比妥鈉誘導(dǎo)麻醉,麻醉成功后將供體新西蘭兔固定于

6、動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上，于頸部局麻并切開(kāi)行氣管插管（3.5＃），深度約6cm，接小動(dòng)物呼吸機(jī)（參數(shù)設(shè)置：容量控制、氧濃度40-50％、潮氣量8ml/kg、呼吸頻率23次/分）。正中開(kāi)胸，游離心臟大血管后經(jīng)右房全身肝素化（400U/kg）,阻斷主動(dòng)脈并灌注改良Stanford停搏液（15ml/kg，4℃),灌注完畢后取心并結(jié)扎修剪心臟血管，把供心置于改良Stanford停搏液中(4℃)保存2小時(shí)。
　　供心移植：麻醉、固定和氣管插管同供體，氣

7、管插管后耳緣靜脈采血2ml送檢。建立耳緣靜脈補(bǔ)液通道并行全身肝素化（400U/kg），于一側(cè)腹股溝處備皮并在垂直于腹股溝中點(diǎn)處做長(zhǎng)約4cm的切口，顯露并上下游離股動(dòng)、靜脈，行Ono’s同種異位心臟移植術(shù)，在心臟復(fù)跳30min，60min，90min于耳緣靜脈通道處采血2ml送檢，并于心臟復(fù)跳2小時(shí)后取下供心結(jié)束實(shí)驗(yàn)。
　　心肌缺血再灌注組：?jiǎn)渭冃泄┬恼。４?小時(shí)，再行同種異位心臟移植。
　　地奧司明預(yù)處理組：受體兔于實(shí)驗(yàn)

8、前10天每天予以地奧司明（80mg/kg）灌胃，每天2次。其余實(shí)驗(yàn)步驟同心肌缺血再灌注組。
　　地奧司明+二乙基二硫代氨基甲酸鈉(DDTC)預(yù)處理組：受體兔于實(shí)驗(yàn)前10天每天予以地奧司明（80mg/kg）灌胃，每天2次。行同種異位心移植前15min，耳緣靜脈注射DDTC（300mg/kg），其余實(shí)驗(yàn)步驟同心肌缺血再灌注組。
　　檢測(cè)指標(biāo)：測(cè)定指定時(shí)間點(diǎn)的心臟心肌酶指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取左室心肌組織標(biāo)本測(cè)定心肌組織含水量、心肌凋亡

9、指數(shù)、光鏡和電鏡下的心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變。
　　結(jié)果：
　　三組供心均能順利復(fù)跳。
　　1.心肌酶：各組新西蘭大白兔移植前基礎(chǔ)心肌酶指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。復(fù)跳后30min、60min、90min三組的所有心肌酶指標(biāo)均顯著升高。90min時(shí)地奧司明預(yù)處理組各項(xiàng)心肌酶指標(biāo)升高幅度明顯低于心肌缺血再灌注組和地奧司明+DDTC預(yù)處理組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；地奧司明+DDTC預(yù)處理組各項(xiàng)心肌酶指標(biāo)升

10、高幅度略微低于心肌缺血再灌注組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.心肌組織含水量：地奧司明預(yù)處理組心肌組織含水量（70.3±1.6%）明顯低于地奧司明+DDTC預(yù)處理組（78.4±1.1%）和心肌缺血再灌注組（80.3±0.9%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；地奧司明+DDTC預(yù)處理組心肌含水量（78.4±1.1%）較心肌缺血再灌注組（80.3±0.9%）稍低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.

11、光鏡下觀察：地奧司明預(yù)處理組：心肌細(xì)胞染色良好形態(tài)接近正常，排列規(guī)則有序，心肌纖維豐富，其間隙和結(jié)構(gòu)基本正常，細(xì)胞核呈藍(lán)染且大小形態(tài)近正常，胞漿呈淡紅染，形態(tài)飽滿；地奧司明+DDTC預(yù)處理組：心肌細(xì)胞排列欠規(guī)則，結(jié)構(gòu)欠清晰，心肌細(xì)胞稍顯肥大，橫紋結(jié)構(gòu)欠清晰，心肌纖維結(jié)構(gòu)稍紊亂且間隙擴(kuò)大，纖維淡染模糊，心肌間質(zhì)出現(xiàn)水腫，部分心肌細(xì)胞出現(xiàn)變性和不同程度壞死，細(xì)胞核溶解、固縮和消失；心肌缺血再灌注組：心肌細(xì)胞普遍呈變性和壞死，細(xì)胞結(jié)構(gòu)和排列秩

12、序紊亂，細(xì)胞間隙增大且界限模糊，大部分細(xì)胞核固縮，個(gè)別溶解、消失，胞漿溶解呈空泡氣球樣變或網(wǎng)狀改變。
　　4.電鏡下觀察：地奧司明預(yù)處理組：心肌細(xì)胞核大致呈三種形態(tài)：梭形、橢圓形、長(zhǎng)桿狀，核膜清晰可見(jiàn)，常染色體為細(xì)顆粒狀，異染色體分布在核膜內(nèi)側(cè)，肌纖維排列未見(jiàn)紊亂，閏盤、Z帶清晰可見(jiàn)，肌原纖維間有桿狀線粒體和糖原顆粒。線粒體排列均勻，線粒體脊和膜清晰可見(jiàn)，L小管存在兩側(cè)肌漿網(wǎng)；地奧司明+DDTC預(yù)處理組：細(xì)胞核不規(guī)則形，核膜尚且清

13、晰，肌纖維排列接近正常，閏盤、Z帶較模糊，線粒體輕微腫脹，部分出現(xiàn)嵴溶解，糖原顆粒減少；心肌缺血再灌注組：細(xì)胞核呈不規(guī)則形，肌纖維排列紊亂，閏盤、Z帶模糊，線粒體較腫脹，嵴溶解，糖原顆粒顯著減少。
　　5.心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)：地奧司明預(yù)處理組偶見(jiàn)凋亡細(xì)胞，而地奧司明+DDTC預(yù)處理組和心肌缺血再灌注組則可見(jiàn)多量的凋亡細(xì)胞。心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)：地奧司明預(yù)處理組（7.2±0.7%）明顯低于地奧司明+DDTC預(yù)處理組（19.4±1.5%）和

14、心肌缺血再灌注組（21.6±1.4%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。地奧司明+DDTC預(yù)處理組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（19.4±1.5%）低于心肌缺血再灌注組（21.6±1.4%），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.地奧司明預(yù)處理在心臟移植中具有心肌保護(hù)作用，主要通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體抗氧自由基的作用起到減輕移植供心缺血再灌注損傷；
　　2.改良One’s模型同種異位股動(dòng)靜脈導(dǎo)管法心臟移植術(shù)成功率高，簡(jiǎn)單