VE-cadherin磷酸化在沖擊流場引發(fā)血管內(nèi)皮損傷中的作用.pdf

1、目的：
　　血流動力學(xué)因素引起血管內(nèi)皮損傷、血管壁炎癥反應(yīng)所致的血管壁重構(gòu)是顱內(nèi)動脈瘤形成的主要病理生理環(huán)節(jié)，我們前期研究表明動脈瘤形成過程中VE-cadherin與p120-catenin表達(dá)同時降低，血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞數(shù)量減少；本研究通過體外培養(yǎng)的細(xì)胞在沖擊流場作用下，檢測VE-cadherin磷酸化誘導(dǎo)的120ctn及其伴侶分子等在不同沖擊時間下的相互影響，探討VE-cadherin磷酸化與血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和細(xì)胞炎癥的

2、關(guān)系及調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　自行設(shè)計的T型流室系統(tǒng)可模擬血管分叉處的血流環(huán)境，并通過提供不同流速的沖擊流體，在流室內(nèi)創(chuàng)造不同條件的血流動力學(xué)環(huán)境。體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）及運用重組慢病毒Y658位點磷酸化（Y658E） VE-cadherin突變體構(gòu)建[A tyrosine to glutamic acid(Y to E)]后，將突變體轉(zhuǎn)染HUVEC。將細(xì)胞種植在22×50mm的載玻片上，待細(xì)胞融合度

3、達(dá)到85-95％后將載玻片置入流室，在250ml/min和500ml/min的流速作用下，觀察3小時、6小時和12小時處理后，HUVEC細(xì)胞形態(tài)、生長方式，及VE-Cadherin、P120ctn、Kaiso、MMP-2、α-catenin和β-catenin的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　正常 HUVEC在沖擊流作用12小時后仍可維持正常貼壁生長。加載250ml/min的流速，作用12小時后沖擊點及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形

4、，細(xì)胞分布未見明顯改變。加載流速500ml/min，6小時后沖擊點及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形，細(xì)胞分布未見明顯改變。12小時后,可見沖擊點處的細(xì)胞過度融合，細(xì)胞間隙變窄。高切應(yīng)力（WSS）和高切應(yīng)力梯度（WSSG）區(qū)的細(xì)胞密度下降且形態(tài)被拉長，部分細(xì)胞向下游遷徙，排列與沖擊流方向平行一致。兩種流速作用12h后，P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso和α-catenin表達(dá)下降，β-catenin表達(dá)未見明顯變化，MMP-2

5、表達(dá)升高；其中P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso及MMP-2的變化具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　重組慢病毒Y658磷酸化（Y658E）VE-cadherin突變體轉(zhuǎn)染后的HUVEC在流室內(nèi)生長時間短于正常HUVEC。加載250ml/min的流速，1小時以內(nèi)沖擊點及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形，但高WSS及高WSSG區(qū)域部分細(xì)胞開始向下游移動并聚集，細(xì)胞部分隨流體方向排列。加載500ml/min時，30分鐘以內(nèi)

6、擊點及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形，細(xì)胞分布未見明顯改變。1小時后，可見高切應(yīng)力（WSS）和高切應(yīng)力梯度（WSSG）區(qū)的細(xì)胞密度明顯下降且形態(tài)被拉長，大量細(xì)胞向下游遷徙并集聚，排列與沖擊流方向平行一致。加載兩種流速作用后，P120ctn、Kaiso、α-catenin表達(dá)下降，β-catenin表達(dá)無明顯變化，MMP-2表達(dá)升高；其中 P120ctn、Kaiso以及 MMP-2的表達(dá)改變具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。空病毒對照組在加載2

7、50ml/min和500ml/min流速后，細(xì)胞形態(tài)和生長方式與正常對照組相比未見明顯改變， VE-Cadherin、P120ctn、Kaiso、α-catenin，β-catenin和 MMP-2的表達(dá)與正常對照組相比也未見明顯改變（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　沖擊流場作用下血管內(nèi)皮細(xì)胞間黏附連接的損害多發(fā)生于高WSS及高WSSG的區(qū)域。血流動力學(xué)的改變可以引起血管內(nèi)皮細(xì)胞在形態(tài)、生長方式及相關(guān)蛋白表達(dá)的改變，進(jìn)而導(dǎo)