常山酮聯(lián)合放射治療對(duì)小鼠移植瘤免疫微環(huán)境影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討常山酮聯(lián)合放射治療對(duì)小鼠移植瘤免疫微環(huán)境影響，并探索其可能的機(jī)制。
　　方法：將40只健康雌性C57BL/6J小鼠右后肢皮下接種Lewis細(xì)胞，建立Lewis肺癌移植瘤模型，接種后第6天（腫瘤長徑達(dá)0.5厘米大小時(shí)）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。挑選35只腫瘤負(fù)荷較相近小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、常山酮組、放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組，放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組，每組7只。對(duì)照組不做處理；常山酮組于接種后第6天至第15天予常山酮腹腔給藥

2、，每只鼠2ug／0.1ml/d；放射治療組于接種后第8天、9天給予移植瘤6MV-X線照射，放射治療劑量為10Gy×2；放射治療聯(lián)合常山酮組給藥處理同常山酮組，放射治療的時(shí)間及劑量同放射治療組；放射治療聯(lián)合抑制劑組于接種后第6天至第15天予TGF-β抑制劑（SB431542終濃度1uM）腹腔給藥，每只小鼠0.1ml/d，放射治療處理同放射治療組。自治療開始每隔 l天用游標(biāo)卡尺測量瘤徑。接種后第15天（照射結(jié)束后第6天）各組隨機(jī)處死3只小鼠

3、，取脾臟制備單細(xì)胞懸液后行FACS檢測脾臟淋巴細(xì)胞中CD4+CD25+FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞Treg細(xì)胞含量；剝離小鼠腫瘤組織，一部分制備單細(xì)胞懸液行FACS檢測腫瘤組織浸潤淋巴細(xì)胞中Treg細(xì)胞含量，剩余部分福爾馬林固定及凍存并通過免疫組織化學(xué)、Elisa、Western Blot等技術(shù)研究不同處理組移植瘤TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路的變化；剩余小鼠觀察移植瘤生長抑制情況，并計(jì)算生存期。
　　結(jié)果:流式結(jié)果顯示：空白對(duì)照組、常山酮組

4、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞中Treg含量無明顯差異（P=0.989），放射治療組腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞中 Treg含量較對(duì)照組明顯升高（P＜0.001），聯(lián)合應(yīng)用常山酮或TGF-β抑制劑組腫瘤組織浸潤淋巴細(xì)胞中Treg含量較放射治療組明顯下降(P值均<0.05)?？瞻讓?duì)照組、常山酮組脾臟 Treg含量無明顯差異（P=0.742），單純放射治療組脾臟 Treg含量較空白對(duì)照組明顯升高（P=0.021），放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組

5、脾臟Treg含量較放射治療組明顯下降(P值均<0.05)；Elisa結(jié)果:空白對(duì)照組和常山酮組腫瘤組織中 TGF-β水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.271)，放射治療組 TGF-β水平較對(duì)照組明顯升高(P=0.001)，而放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組TGF-β水平較單純放射治療組均明顯降低(P值均<0.05)。免疫組織化學(xué)結(jié)果：空白對(duì)照組和常山酮組腫瘤組織中TGF-β1低表達(dá)，放射治療組TGF-β1呈陽性表達(dá)，放射治療

6、聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組TGF-β1低表達(dá)。
　　Western Blot結(jié)果顯示，各處理組Smad2蛋白表達(dá)無明顯差異，空白對(duì)照組與常山酮組p-Smad2蛋白表達(dá)水平無明顯差異，放射治療組p-Smad2蛋白表達(dá)較對(duì)照組升高，放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合抑制劑組p-Smad2的表達(dá)較單純放射治療組降低；各組Smad6蛋白表達(dá)水平亦有差異，常山酮組和空白對(duì)照組Smad6蛋白表達(dá)無明顯差異，放射治療組Smad

7、6蛋白表達(dá)較對(duì)照組下降，而放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合抑制劑組Smad6的表達(dá)較單純放射治療組均升高。治療前各組小鼠腫瘤體積無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.377），治療后各時(shí)間點(diǎn)空白對(duì)照組及常山酮組小鼠腫瘤體積均無明顯差異（P值均＞0.05），放射治療結(jié)束后第5天，放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合 TGF-β抑制劑組移植瘤體積開始小于對(duì)照組(P值分別為0.008、0.023、0.007)，放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組及放

8、射治療聯(lián)合 TGF-β抑制劑組腫瘤體積無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值均＞0.5），放射治療結(jié)束后第9天，放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合 TGF-β抑制劑組腫瘤體積開始小于放射治療組(P值分別為0.049、0.025)，治療后各時(shí)間點(diǎn)放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組腫瘤體積均無明顯差異（P值均＞0.05）。空白對(duì)照組及常山酮組小鼠生存期無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.784)，OS分別為28天和34天，放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組及