異基因造血干細(xì)胞移植后免疫功能重建及CD4+CD25highFOXP3+與移植物抗宿主病的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　背景：目前血液病發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，且發(fā)病年齡越來(lái)越年輕化，血液病的發(fā)病機(jī)制離不開(kāi)造血干細(xì)胞及造血微環(huán)境的病理變化，其中主要是因?yàn)槊庖吖δ芪蓙y。近年來(lái)，隨著免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科的不斷發(fā)展，新的診療方法的引進(jìn)及新藥的研發(fā)，血液病診療模式發(fā)生了根本性變化，這些進(jìn)展顯著改善了患者的生存質(zhì)量，延長(zhǎng)了患者的生存期。其中造血干細(xì)胞移植成為治療良惡性血液病的有效手段。然而移植物抗宿主病（GVHD）的發(fā)

2、生是移植患者死亡的重要原因，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)GVHD往往與移植后患者免疫功能重建延遲密切相關(guān)。
　　目的1．分析血液病患者行異基因造血干細(xì)胞移植（Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）后免疫功能重建情況；2．初步探討CD4+CD25highFOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）與GVHD發(fā)生的相關(guān)性。
　　研究方法：
　　1．選取20例20

3、14年4月至2015年4月在本院血液科行異基因造血干細(xì)胞移植的血液病患者，其中男10例，女10例，平均年齡21.7(3~46)歲，分別采集20例患者移植前一個(gè)月以及移植后不同時(shí)期（移植后+1、+3、+6和+12個(gè)月）的外周血，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)患者移植前一個(gè)月外周血中 T淋巴細(xì)胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+）水平，同時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)移植后+1、+3、+6和+12個(gè)月外周血T淋巴細(xì)胞亞群（CD3+

4、、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+、CD4+CD25highFOXP3+）水平，分析異基因造血干細(xì)胞移植后患者免疫功能重建情況。同期監(jiān)測(cè)20例健康體檢者外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平作為健康對(duì)照組。通過(guò)對(duì)比移植前血液病患者和健康對(duì)照組外周血 T淋巴細(xì)胞亞群水平，反映移植前血液病患者免疫功能狀態(tài)。動(dòng)態(tài)觀察血液病患者移植后各T淋巴細(xì)胞亞群變化趨勢(shì)，評(píng)價(jià)移植后患者免疫功能恢復(fù)情況；
　　2．應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測(cè)20例患者移植后

5、外周血CD4+CD25highFOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平變化，同時(shí)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（QRT-PCR）檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞FOXP3 mRNA的表達(dá)，初步探討其與GVHD發(fā)生的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1．與健康對(duì)照組相比，移植前20例血液病患者均存在細(xì)胞免疫異常，其中15例惡性血液病患者外周血 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD56+明顯減低，分別為(54.12±5.41)％、(27.25±9.13)%、

6、(0.91±0.74)%、(9.37±3.41)%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，CD8+增高，為(31.77±7.16)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；5例 AA患者外周血CD3+增高，為(66.79±7.35)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CD8+明顯增高，為(35.69±6.78)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，CD4+、CD4+/CD8+、CD56+明顯減低，分別為(33.73±7.26)%、(1.23

7、±0.56)%、(7.46±2.83)%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；
　　2．隨訪至2015年12月，患者 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+、CD4+CD25highFOXP3+水平在移植后都有不同程度恢復(fù)，基本在+12個(gè)月時(shí)恢復(fù)至移植前水平。CD56+于移植后3個(gè)月逐漸恢復(fù)，并最先恢復(fù)至正常水平；CD8+恢復(fù)早于CD4+，CD4+減少持續(xù)約1年以上；CD4+/CD8+比值倒置也持續(xù)1年以上；

8、
　　3．隨訪至2015年12月，共有9例患者出現(xiàn)III度以上急性移植物抗宿主?。ˋcute graft versus host diseasea,aGVHD），2例死亡，其余18例存活。發(fā)生aGVHD的患者CD4+CD25highFOXP3+水平及FOXP3 mRNA表達(dá)均低于同期未發(fā)生aGVHD患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，+1月分別為(0.32±0.45)%、(1.92±0.70)%，(278.65±241.36

9、)×106、(1123.45±1072.31)×106；+3月分別為(0.73±0.51)%、(2.35±0.72)%，(352.77±421.45)×106、(2052.09±2169.13)×106；+6月分別為(1.01±0.54)%、(2.63±0.77)%，(785.67±654.32)×106、(3114.48±3076.82)×106；+12月分別為(1.43±0.46)%、(3.23±057)%，(1721.47±120

10、4.22)×106、(3179.25±4563.08)×106。同時(shí) CD4+CD25highFOXP3+水平與 aGVHD之間具有良好的線性回歸關(guān)系（r=0.882，r2=0.778）；aGVHD控制后（+6月）患者外周血單個(gè)核細(xì)胞FOXP3 mRNA表達(dá)較aGVHD發(fā)生時(shí)（+1、+3月）顯著上升(P=0.025)。
　　結(jié)論：
　　1．良惡性血液病患者均存在細(xì)胞免疫功能異常；
　　2．異基因造血干細(xì)胞移植后T淋巴細(xì)

11、胞亞群都有不同程度恢復(fù)，但免疫功能完全重建是一個(gè)緩慢的過(guò)程；
　　3．CD4+CD25highFOXP3+水平與 GVHD的發(fā)生具有良好的相關(guān)性，臨床上可作為預(yù)測(cè)GVHD發(fā)生的參考指標(biāo)，對(duì)GVHD的診斷和治療具有一定的指導(dǎo)意義；
　　4．對(duì)移植后患者T淋巴細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，特別是對(duì) CD4+CD25highFOXP3+水平的監(jiān)測(cè)在臨床中具有重要意義，可在臨床出現(xiàn)aGVHD癥狀前預(yù)測(cè)患者aGVHD的發(fā)生情況，從而降低移植患者