何首烏醇提液對(duì)LPS誘導(dǎo)致大鼠肝損傷機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本論文旨在建立一種與臨床特征更為接近的何首烏致大鼠肝損傷動(dòng)物模型，并在此模型基礎(chǔ)上探討何首烏醇提液致大鼠肝臟藥物代謝酶細(xì)胞色素P450(CYP450)的表達(dá)調(diào)節(jié)作用；接著對(duì)固有免疫炎癥信號(hào)通路Toll樣受體4（TLR4）介導(dǎo)的MyD88依賴性信號(hào)通路和非依賴性（TRIF）信號(hào)通路下游相關(guān)因子的表達(dá)與何首烏肝毒性作用機(jī)制的相關(guān)性進(jìn)行探究。
　　方法：
　　雄性SD大鼠130只，隨機(jī)分為8組：空白對(duì)照組(con

2、trol，20只)，脂多糖組(LPS，20只)，對(duì)乙酰氨基酚組(APAP，15只)，LPS+對(duì)乙酰氨基酚組(LPS+APAP，15只)，何首烏低劑量組(PMT-L，15只)、LPS+何首烏低劑量組(LPS+PMT-L，15只)、何首烏高劑量組(PMT-H，15只)和LPS+何首烏高劑量組(LPS+PMT-H，15只)。尾靜脈注射4mg/kg體重的誘導(dǎo)劑LPS，2h后，APAP組和LPS+APAP組大鼠分別按組別灌胃給予625mg/kg對(duì)

3、乙酰氨基酚，PMT-L和LPS+PMT-L組給予6g/kg何首烏，PMT-H和LPS+PMT-H組給予12g/kg何首烏，每日一次，連續(xù)給藥7d。每天觀察大鼠體重變化，在造模過程中，第2h、14h、5d和8d對(duì)各個(gè)劑量組大鼠腹主動(dòng)脈采血，檢測(cè)肝功能生化指標(biāo)；解剖，記錄肝重；HE染色組織病理學(xué)檢查；熒光法測(cè)定肝細(xì)胞中細(xì)胞色素CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1酶活性的變化；提取肝臟總RNA，采用Realtime-PCR法檢測(cè)這三種亞酶

4、及MyD88、NF-KB P65、TRIF、IRF-3 mRNA表達(dá)情況，并應(yīng)用Western blot法檢測(cè)CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、TLR-4、MyD88、NF-KB P65、TRIF、IRF-3蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　大鼠經(jīng)LPS誘導(dǎo)后，與空白對(duì)照組相比，體重下降，肝臟系數(shù)升高；第2h和14h，LPS組、LPS+APAP組和LPS+PMT-L/-H組ALT、AST和ALP含量顯著升高；組織病理

5、學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，大鼠尾靜脈注射LPS誘導(dǎo)2h后，肝實(shí)質(zhì)微小肉芽腫，隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，LPS組大鼠肝損傷逐漸恢復(fù)，于第8天發(fā)現(xiàn)，LPS組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞質(zhì)稍紅染變性，LPS+APAP組和LPS+PMT高低劑量組肝細(xì)胞灶狀壞死，伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)。何首烏醇提液組能明顯降低大鼠肝臟CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1酶的活性；RT-PCR法測(cè)定發(fā)現(xiàn)何首烏醇提液能顯著降低大鼠肝臟CYP1A2 mRNA表達(dá)，顯著升高大鼠肝臟CYP3A1、T

6、LR-4、MyD88、NF-kB P65、TRIF、IRF-3mRNA的表達(dá)，而對(duì)CYP2E1 mRNA表達(dá)沒有顯著影響；Western-blotting法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，何首烏醇提液能顯著降低大鼠肝臟CYP1A2蛋白的表達(dá)，而對(duì)CYP2E1和CYP3A1蛋白表達(dá)沒有顯著變化，能顯著升高大鼠肝臟TLR-4、MyD88、NF-kB P65、TRIF、IRF-3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　以LPS為誘導(dǎo)劑可以很好地模擬臨床何首烏特異