茶溴香酰胺脂質(zhì)體的制備和抗肺癌活性的研究.pdf

1、目的：茶氨酸具有降壓、鎮(zhèn)靜、提高機(jī)體免疫力、對(duì)某些抗癌藥物的生物調(diào)節(jié)作用、提高化療效果，降低化療副作用等多種藥理作用，與傳統(tǒng)化學(xué)藥物相比具有毒性低的特點(diǎn)。脂質(zhì)體是一種靶向藥物載體，具有減少藥物的劑量和降低藥物的毒性的特點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)室合成的茶氨酸衍生物茶溴香酰胺（TBrC），經(jīng)過(guò)前期研究顯示了較高的抗癌活性，為更好地發(fā)揮其抗癌作用，增加藥物在體內(nèi)外藥效，提高生物利用度，本課題制備了茶溴香酰胺脂質(zhì)體（TBrC-L）和其與紫杉醇的復(fù)方脂質(zhì)體（T

2、BrC+P-L），考察其制備方法、處方和工藝及穩(wěn)定性，以紫杉醇脂質(zhì)體等為陽(yáng)性對(duì)照，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，研究了制備的脂質(zhì)體對(duì)人肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和遷移的影響與其作用的分子機(jī)制。
　　方法：
　　1.建立TBrC-L和TBrC+P-L的HPLC含量測(cè)定方法；以包封率為指標(biāo)，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)篩選TBrC-L和TBrC+P-L的制備方法并進(jìn)行工藝優(yōu)化，確定最佳處方；對(duì)TBrC-L和TBrC+P-L進(jìn)行初步穩(wěn)定性和質(zhì)量研究。
　　2.使用MT

3、T法和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)TBrC-L和TBrC+P-L對(duì)人肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響。
　　3.用Transwell chamber法觀察TBrC-L和TBrC+P-L對(duì)人肺癌A549細(xì)胞遷移的影響。
　　4.應(yīng)用蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)TBrC-L和TBrC+P-L對(duì)人肺癌A549細(xì)胞中與生長(zhǎng)和遷移相關(guān)的蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并探索其可能作用的分子機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1.采用薄膜-超聲分散法分別得到了TBrC-

4、L和TBrC+P-L，通過(guò)單因素試驗(yàn)篩選TBrC-L的最優(yōu)處方是：磷脂與膽固醇的比為10:1，脂藥比為5:1，氯仿為10mL，生理鹽水為15mL；TBrC+P-L的最優(yōu)處方是：磷脂與膽固醇的比為10:1，茶溴香酰胺與紫杉醇的質(zhì)量比為4:1，氯仿為10mL，生理鹽水為15mL。該工藝條件下，TBrC-L的平均包封率可達(dá)76.6％，TBrC+P-L中TBrC的包封率為64.5%，紫杉醇的包封率為42%，且粒徑分布均勻，批間差異較小。

5、　　2.MTT結(jié)果表明：16～250μM的TBrC-L和TBrC+P-L對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)均表現(xiàn)出抑制作用，并呈現(xiàn)出顯著的劑量—時(shí)間依賴(lài)關(guān)系。流式細(xì)胞術(shù)分析顯示TBrC-L和TBrC+P-L可以促進(jìn)人肺癌A549細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　3.Transwell chamber檢測(cè)結(jié)果表明：TBrC-L和TBrC+P-L可以降低人肺癌A549細(xì)胞的遷移能力。
　　4.Western blotting表明：TBrC-L和TBr

6、C+P-L能夠上調(diào)抑制生長(zhǎng)和誘導(dǎo)凋亡的相關(guān)蛋白因子Bax、PARP-1和caspase-3的表達(dá)水平，下調(diào)促進(jìn)生長(zhǎng)和遷移以及抗凋亡的相關(guān)蛋白因子VEGFR1、Bcl-2、Akt、NF-κB蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)論：TBrC-L和TBrC+P-L對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移有顯著的抑制作用，并且TBrC+P-L的抑制作用更強(qiáng)；促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和遷移可能是其作用重要的分子機(jī)制，其中涉及到的蛋白因子包括Bcl-2