慢性乙型肝炎患者HLA-G+MDSCs亞群分析及臨床意義探討.pdf

1、目的:
　　病毒持續(xù)性感染與機(jī)體的免疫功能低下有關(guān)。人類白細(xì)胞抗原-G(humanleukocyte antigen G，HLA-G)和髓源抑制性細(xì)胞(myeloid derived suppressor cell，MDSCs)在誘導(dǎo)機(jī)體免疫耐受中具有重要作用。本研究通過建立六色流式細(xì)胞術(shù)，檢測(cè)慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B，CHB)患者和正常人群外周血MDSCs(Lin-HLA-DR-CD33+CD11b+

2、)、HLA-G+ MDSCs及其亞群的表達(dá)水平，分析各細(xì)胞亞群與CHB患者臨床病理因素的相關(guān)性，探討CHB患者外周血中HLA-G+MDSCs百分比及其臨床意義。
　　方法:
　　1.標(biāo)本選擇
　　連續(xù)收集2015年6月12日至2015年10月10日在溫州醫(yī)科大學(xué)附屬浙江省臺(tái)州醫(yī)院就診的50例CHB患者及37例體檢中心正常人群外周血標(biāo)本，以正常人群外周血標(biāo)本為對(duì)照組。CHB診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2000年西安中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生

3、蟲病學(xué)會(huì)和肝病學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議制定的標(biāo)準(zhǔn)[1]。既往有乙型肝炎病史或HBsAg陽性超過6個(gè)月，現(xiàn)HBsAg和（或）HBV DNA仍為陽性者，可診斷為慢性HBV感染。根據(jù)HBV感染者的血清學(xué)、病毒學(xué)、生物化學(xué)試驗(yàn)及其他臨床和輔助檢查結(jié)果，可將慢性乙型肝炎分為HBeAg陽性慢性乙型肝炎:血清HBsAg、HBeAg陽性、抗HBe陰性，HBV DNA陽性，ALT持續(xù)或反復(fù)升高，或肝組織學(xué)檢查有肝炎病變;HBeAg陰性慢性乙型肝炎:血清HBsAg陽

4、性，HBeAg持續(xù)陰性，抗HBe陽性或陰性，HBV DNA陽性，ALT持續(xù)或反復(fù)異常，或肝組織學(xué)檢查有肝炎病變。
　　2.病毒學(xué)評(píng)估
　　2.1乙肝病毒標(biāo)志物HBsAg，HBeAg，anti-HBs，anti-HBc，anti-HBe，以及HCV，HDV，HIV-1和HIV-2使用熒光酶聯(lián)免疫分析試劑盒完成。
　　2.2商業(yè)化實(shí)時(shí)定量PCR診斷試劑盒檢測(cè)外周血HBV DNA拷貝數(shù)。
　　2.3全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)

5、血清中ALT、AST、ALP、GGT、TBil含量。
　　3.外周血MDSCs，HLA-G+MDSCs及其亞群表達(dá)百分比檢測(cè)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MDSCs，HLA-G+ MDSCs及其亞群在外周血中的表達(dá)百分比，所有流式數(shù)據(jù)用FlowJo7.6.1進(jìn)行分析。
　　4.統(tǒng)計(jì)分析
　　應(yīng)用SPSS17.0(SPSS，Inc.，Chicago，IL)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。連續(xù)型數(shù)值變量采用獨(dú)立樣本Kolmogorov-Smirn

6、ov正態(tài)性檢驗(yàn)。不同組間MDSCs，HLA-G+ MDSCs及其亞群百分比比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。MDSCs亞群與臨床參數(shù)間的相關(guān)性采用Spearman檢驗(yàn)。雙尾檢驗(yàn)p＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.CHB患者和正常對(duì)照人群外周血總MDSCs、單核CD14+MDSCs(M-MDSCs)和粒系CD15+ MDSCs(G-MDSCs)表達(dá)百分比無顯著性差異(p＞0.05)。
　　2.CHB患

7、者HLA-G+ MDSCs表達(dá)百分比顯著高于對(duì)照組(3.30％ vs0.40％;p＜0.001)。此外，CHB患者HLA-G+ M-MDSCs(0.99％ vs0.00％;p＜0.001)和HLA-G+ G-MDSCs(0.78％ vs0.00％;p＜0.001)表達(dá)百分比也顯著高于對(duì)照組。
　　3.CHB患者HLA-G+ G-MDSCs表達(dá)百分比與HBV病毒DNA載量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.310;p=0.032)，且HBeAb陽性

8、患者HLA-G+ G-MDSCs表達(dá)百分比顯著高于HBeAb陰性患者（1.13％ vs0.33％;p=0.048）。
　　4.CHB患者HLA-G+ MDSCs表達(dá)百分比與ALP水平呈負(fù)相關(guān)，G-MDSCs表達(dá)百分比與GGT含量呈正相關(guān)(r=0.372;p=0.008)。
　　結(jié)論:
　　本研究首次發(fā)現(xiàn)慢性乙肝患者外周血中HLA-G+ MDSCs新亞群。該亞群及HLA-G+M-MDSCs、HLA-G+ G-MDSCs在