秋水仙素與順鉑誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡的定量多肽組學(xué)研究.pdf

1、多肽組學(xué)是一種可以定性和定量分析生物樣品中的多肽的技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)可應(yīng)用于發(fā)現(xiàn)疾病的生物標(biāo)記分子、檢測(cè)活性多肽、研究蛋白水解調(diào)控活性肽過(guò)程等方面。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用多肽組學(xué)的方法研究在秋水仙素和順鉑誘導(dǎo) Hela細(xì)胞產(chǎn)生凋亡后，細(xì)胞內(nèi)多肽水平的變化。
　　細(xì)胞凋亡是生物體中一項(xiàng)非常重要的生理過(guò)程，在維持生物機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、免疫功能、生長(zhǎng)發(fā)育等生命活動(dòng)中具有重要的作用，因而研究凋亡過(guò)程具有重要意義。
　　秋水仙素是一種用于治療痛風(fēng)和癌癥

2、的生物堿。它可以通過(guò)抑制微管蛋白聚合引起細(xì)胞凋亡。順鉑是一種重金屬絡(luò)合物，可結(jié)合于DNA上抑制DNA的復(fù)制過(guò)程，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。盡管有很多方法解釋秋水仙素與順鉑引起細(xì)胞凋亡的機(jī)制，但這些藥物引起細(xì)胞內(nèi)多肽的變化還未見報(bào)導(dǎo)。另外，因?yàn)閷?duì)細(xì)胞內(nèi)多肽可能對(duì)很多生理過(guò)程包括凋亡過(guò)程可能會(huì)發(fā)揮作用缺乏認(rèn)識(shí)，所以目前利用細(xì)胞內(nèi)的多肽信息用于對(duì)細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究是相當(dāng)有限的。
　　本研究用定量多肽組學(xué)方法檢測(cè)了用200μM秋水仙素與50μM順鉑處

3、理Hela細(xì)胞24小時(shí)后多肽的變化。結(jié)果如下：
　　1.用CCK-8檢測(cè)法檢測(cè)秋水仙素與順鉑對(duì)細(xì)胞存活率的影響，隨藥物濃度增加，細(xì)胞活力下降。
　　2.用200μM秋水仙素處理Hela細(xì)胞24小時(shí)后，一共鑒定出203種多肽，這些多肽來(lái)自101種不同的前體蛋白。其中有84種多肽發(fā)生顯著變化。在這些明顯變化的多肽中，有3條多肽是來(lái)自相應(yīng)的蛋白前體的N端，有24條多肽來(lái)自相應(yīng)的蛋白前體的C端。其他的57條多肽則來(lái)自蛋白前體的中間部

4、分。
　　3.用50μM順鉑處理Hela細(xì)胞24小時(shí)后，共提取出61條多肽，這些多肽來(lái)自26種不同的前體蛋白。提取出的多肽中有34條多肽發(fā)生顯著變化。這些顯著變化的多肽中，只有1條多肽是來(lái)自相應(yīng)的蛋白前體的N端，有14條多肽來(lái)自相應(yīng)的蛋白前體的C端。其他的19條多肽則來(lái)自蛋白前體的中間部分。
　　4.在兩種藥物處理細(xì)胞后提取出的相同多肽中，有些多肽在兩種藥物處理后均產(chǎn)生下調(diào)，有些多肽則只在一種藥物處理后產(chǎn)生顯著變化，沒有發(fā)現(xiàn)