極大節(jié)旋藻實時熒光定量PCR內(nèi)參基因的選擇.pdf

1、用實時熒光定量PCR對基因表達水平進行檢測時，需要內(nèi)參基因?qū)Y(jié)果數(shù)據(jù)進行校正。內(nèi)參基因必須是在所研究的實驗條件下具有相似的表達水平的基因。因此選擇合適的內(nèi)參基因是通過實時熒光定量PCR對目的基因進行準確定量的重要的前提條件。本實驗中，我們利用實時熒光定量PCR對極大節(jié)旋藻中16SrRNA、TEF(翻譯延伸因子，GTPases)、RPL13(核糖體蛋白)、PSR(藻藍蛋白β亞基)、CYP(親環(huán)素家族一員)、GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫

2、氫酶)、Hsp(熱休克蛋白)和rpoD(RNA聚合酶σ70因子)八個候選基因在正常生長(設(shè)為對照組)、低溫、低光強、氮磷缺乏及低pH五個環(huán)境條件處理下的穩(wěn)定性進行檢測，得到基因在樣品中的表達水平Cq值。然后用Bestkeeper、Normfinder。和geNorm三個內(nèi)參基因篩選軟件對每個基因在樣品中的Cq值進行分析，得到不同基因在樣品中的表達差異，并且從中選出表達最穩(wěn)定的基因作為合適的內(nèi)參基因。雖然基于不同的算法，但是三個篩選軟件的