模型生物膜體系的構(gòu)建及其基于磷脂酶A2的水解研究.pdf

1、本實驗通過構(gòu)建模型生物膜體系，并利用和頻振動光譜(SFG)、共聚焦熒光顯微鏡(LSCM)衰減全反射紅外光譜(ATR-FTIR)等多種表征手段，在形態(tài)學(xué)、反應(yīng)動力學(xué)和分子結(jié)構(gòu)等方面全面探究磷脂酶A2與生物膜的作用，從現(xiàn)象到分子層面對磷脂酶A2的水解作用提供一個深入、一致的系統(tǒng)性解釋，為磷脂酶的生物學(xué)研究提供一個較為完整的模型。
　　本文通過三種光學(xué)技術(shù)——和頻振動光譜(SFG)、共聚焦熒光顯微鏡(LSCM)和衰減全反射紅外光譜(AT

2、R-FTIR)，研究了平面磷脂雙分子層在鈣離子依賴性蜂毒磷脂酶A2(bvPLA2)作用下的水解過程。研究采用熒光共定位的方法，通過LSCM觀測，追蹤水解的動態(tài)過程和形態(tài)學(xué)變化，半定量以及定性地闡釋了水解產(chǎn)物的空間分布情況。結(jié)果表明，水解產(chǎn)物之一的脂肪酸大部分從界面上脫離并游離到溶液介質(zhì)當(dāng)中，而另一個水解產(chǎn)物溶血磷脂則在界面上形成了穩(wěn)定的自組裝微管結(jié)構(gòu)。ATR-FTIR實驗的觀測結(jié)果同樣佐證了這一動態(tài)過程。SFG實驗明確地揭示了鈣離子在水

3、解過程中發(fā)揮的作用，即通過連接磷脂膜和吸附在其表面的磷脂酶，誘導(dǎo)磷脂酶分子取向發(fā)生變化，從而有效激發(fā)界面上磷脂的水解反應(yīng)。本研究以界面磷脂水解反應(yīng)為例，建立了一個基于現(xiàn)代光學(xué)技術(shù)、能夠在分子和微觀層面上表征界面信息的實驗體系，對于探究和理解磷脂水解的這一重要的生物物理化學(xué)過程有很大的幫助。
　　此外，為了優(yōu)化和擴展實驗體系，本文在其他熒光標(biāo)記手段上和多種模型雙層膜制備上有所嘗試，制備出可用于熒光標(biāo)記且不易淬滅的新型硅量子點，并制備