果蠅14-3-3ξ基因選擇性剪接機制的研究.pdf

1、真核生物基因在轉(zhuǎn)錄后需要經(jīng)過一系列復(fù)雜的后加工過程才能夠成為具有正常生物學(xué)功能的成熟mRNA，后加工過程包括加帽、加尾、RNA編輯和選擇性剪接等。而前體mRNA的選擇性剪接則顯著增大了蛋白質(zhì)的多樣性，以及基因表達的復(fù)雜程度。真核生物的內(nèi)含子有一個明顯的特征，就是在很多物種中其5’和3’剪切位點的基本序列都具有相對很高的保守性，內(nèi)含子從mRNA前體轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中的去除和隨后外顯子的連接稱作mRNA前體的剪接，它是構(gòu)成真核基因表達和基因調(diào)控水平

2、的一個重要方面。選擇性剪接在真核生物蛋白質(zhì)組的擴展以及新功能的產(chǎn)生中起著積極的作用，其多種剪接形式在功能調(diào)控水平上受到越來越多的重視，特別是通過改變生物大分子的局部結(jié)構(gòu)導(dǎo)致的細微調(diào)控對重要功能產(chǎn)生的影響。
　　 14-3-3蛋白家族的成員形成了一組分子量為30kDa的高度保守的酸性蛋白，在許多器官和組織中廣泛表達。14-3-3現(xiàn)已被證實是一個二聚體蛋白家族，能夠調(diào)控蛋白質(zhì)之間的相互作用。其作用涉及細胞信號通路，細胞周期進程的調(diào)控

3、，胞內(nèi)靶向作用，細胞骨架結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄等方面。二聚體結(jié)構(gòu)的特定組成成分可能會影響與14-3-3相互作用的蛋白，這種相互作用的調(diào)控通常包括相互作用蛋白的磷酸化作用，在一些情況下，14-3-3亞型的磷酸化作用本身可以調(diào)控蛋白相互作用。
　　 互斥剪接是一種受到嚴格調(diào)控的選擇性剪接方式，包括互斥基因剪接以及互斥外顯子剪接，研究較多的是互斥外顯子剪接，也即在一個外顯子簇中最終只有其中一個外顯子被保留在成熟的mRNA中，從而增加生物體的蛋白質(zhì)

4、多樣性。我們發(fā)現(xiàn)Drosophilamelanogaster14-3-3基因含有互斥外顯子5a、5b、5c，比較基因組學(xué)分析結(jié)果揭示了調(diào)控14-3-3前體mRNA互斥剪接的內(nèi)部元件：兩段高度保守的選擇序列以及一段錨定序列，且它們之間能形成良好的互補配對。在本研究中，我們構(gòu)建了大量的突變體來探究D. melanogaster14-3-3基因的選擇性剪接機制，結(jié)果表明，14-3-3基因嵌合外顯子5b重組斷裂點后面的一段序列可能對該基因的選擇