NAG-1在雙氯芬酸鈉防治ERCP術(shù)后胰腺炎中的作用機(jī)制.pdf

1、研究一：雙氯芬酸鈉影響ERCP術(shù)后胰腺炎中NAG-1水平的臨床研究
　　背景：逆行性胰膽管造影術(shù)（EndoscopicRetrograde Cholangio-Pancreatography,ERCP）是目前臨床診治膽胰系統(tǒng)疾病的重要方法。但由于ERCP屬于侵入性方法，反復(fù)插管使十二指腸乳頭及括約肌損傷致胰管內(nèi)壓升高，造影劑反復(fù)顯影和過度充盈、胰管機(jī)械性損傷等可導(dǎo)致一系列相關(guān)并發(fā)癥，主要有ERCP術(shù)后急性胰腺炎（post-ERCP

2、 pancreatitis,PEP）、消化道出血、穿孔、膽道感染等，其中最常見和最嚴(yán)重的并發(fā)癥為PEP，其發(fā)生率為1％-10%，高?；颊甙l(fā)生率可達(dá)30%，故PEP的防治十分重要。國(guó)內(nèi)外廣泛研究生長(zhǎng)抑素及其類似物、鈣離子拮抗劑、硝酸甘油、IL-10、肝素、蛋白酶抑制劑、甾體類抗炎藥等對(duì)PEP的預(yù)防作用，但目前尚無統(tǒng)一的研究結(jié)論。非甾體類抗炎藥(non-steroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)在預(yù)防

3、PEP中的作用得到多項(xiàng)研究肯定，在NSAIDs預(yù)防PEP的作用機(jī)制中，NAG-1的作用逐漸受到關(guān)注。由于NAG-1具有一定的抗炎作用，因此，本研究擬探討雙氯芬酸鈉對(duì)術(shù)后胰腺炎的預(yù)防作用，并對(duì)其可能機(jī)制進(jìn)行研究。
　　目的：探討雙氯芬酸鈉對(duì)PEP的預(yù)防作用，同時(shí)探討雙氯芬酸鈉對(duì)PEP中NAG-1水平的影響。
　　方法：收集2012年9月-2013年10月于我院進(jìn)行ERCP患者120例，隨機(jī)分為雙氯芬酸鈉組和對(duì)照組，每組60例，

4、雙氯芬酸鈉組患者ERCP術(shù)后立即肌注奧爾芬1支（含雙氯芬酸鈉75mg），收集兩組患者術(shù)前、術(shù)后3h及術(shù)后24h血液行淀粉酶檢測(cè)，并觀察腹痛發(fā)生情況，計(jì)算兩組患者PEP發(fā)生率。各組測(cè)定30例術(shù)前、術(shù)后3h及術(shù)后24h ERCP患者血清中NAG-1水平，同時(shí)通過RT-PCR及WesternBlot方法檢測(cè)血漿中NAG-1 mRNA及蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：雙氯芬酸鈉組PEP發(fā)生率（6.67%）低于對(duì)照組（20.00%）。雙氯芬酸鈉組

5、術(shù)后3h、24h淀粉酶活性分別為（202.70±120.44）U/L和（209.13±157.14）U/L，低于對(duì)照組的（283.57±178.39）U/L和（305.97±208.69）U/L（P均<0.05）。雙氯芬酸鈉組術(shù)后3hNAG-1水平高于術(shù)前及對(duì)照組術(shù)后3h（P均<0.05）。同時(shí)，雙氯芬酸鈉組患者ERCP術(shù)后3h血漿中NAG-1 mRNA和蛋白表達(dá)較術(shù)前及對(duì)照組術(shù)后3h高（P均<0.01）。
　　結(jié)論：雙氯芬酸鈉具

6、有預(yù)防PEP發(fā)生的作用，可能與促進(jìn)NAG-1水平增加相關(guān)。
　　研究二：NAG-1在雙氯芬酸鈉防治小鼠急性胰腺炎中的作用探討
　　背景：PEP是ERCP術(shù)后最常見、最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，目前大量研究證實(shí)，NSAIDs藥物可用于PEP的預(yù)防，并推測(cè)NSAIDs可能通過抑制PG的合成和阻斷胰腺炎的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)預(yù)防PEP發(fā)生。雙氯芬酸鈉是NSAIDs藥物之一，是COX及PLA2的抑制劑，我們以前研究證實(shí)，雙氯芬酸鈉具有預(yù)防PEP發(fā)生

7、的作用，應(yīng)用雙氯芬酸鈉的ERCP術(shù)后患者血清中NAG-1水平、NAG-1mRNA及蛋白表達(dá)量均明顯升高，提示雙氯芬酸鈉可能通過促進(jìn)NAG-1的表達(dá)減少胰腺炎的發(fā)生。為進(jìn)一步闡述NAG-1在雙氯芬酸鈉防治PEP過程中的作用機(jī)制，我們通過制備小鼠胰腺炎模型，探討并闡述雙氯芬酸鈉預(yù)防PEP的可能機(jī)制，為雙氯芬酸鈉防治PEP提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
　　目的：探討雙氯芬酸鈉對(duì)雨蛙肽誘導(dǎo)小鼠急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP

8、）的作用及可能機(jī)制。
　　方法：采用C57BL/6小鼠通過腹腔注射雨蛙肽方法建立AP模型，實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、AP組、AP+雙氯芬酸鈉組。AP組小鼠雨蛙肽50μg/kg腹腔注射，1次/h，共7次；AP+雙氯芬酸鈉組小鼠在雨蛙肽注射前1h腹腔注射15mg/kg雙氯芬酸鈉1次；正常對(duì)照組腹腔注射相同體積的生理鹽水。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死小鼠，留取血清采用比色法檢測(cè)淀粉酶、脂肪酶活性，采用ELISA方法檢測(cè)IL-1?、IL-6、IL-8、TNF

9、-ɑ及NAG-1水平，采用RT-PCR及Western Blot方法檢測(cè)NAG-1mRNA和蛋白表達(dá)量；制備胰腺和肺組織勻漿，采用ELISA方法檢測(cè)IL-1?、IL-6、IL-8、TNF-ɑ、NAG-1水平，采用比色法檢測(cè)髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)活力，采用RT-PCR及Western Blot方法檢測(cè)NAG-1mRNA和蛋白表達(dá)量；測(cè)量胰腺、肺濕重與小鼠體重比；胰腺和肺組織HE染色觀察病理學(xué)改變。

10、　　結(jié)果：AP組血清淀粉酶及脂肪酶活性、胰腺和肺濕重與小鼠體重比均較正常對(duì)照組高（P<0.05），AP+雙氯芬酸鈉組較AP組較AP組不同程度降低（P<0.05）。AP組胰腺組織可見胰腺間質(zhì)充血水腫，小葉間隙增寬，腺泡腫脹，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；肺組織可見肺間質(zhì)增寬，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，AP+雙氯芬酸鈉組胰腺及肺部病理炎癥反應(yīng)減輕，病理評(píng)分差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。AP組血清IL-1?、IL-6、IL-8、TNF-ɑ水平、胰腺和肺勻漿IL

11、-1?、IL-6、IL-8、TNF-ɑ水平和MPO活力均較正常對(duì)照組不同程度升高（P<0.05），AP+雙氯芬酸鈉組上述指標(biāo)較AP組不同程度降低（P<0.05）。三組血清中NAG-1表達(dá)的差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在胰腺和肺組織中，AP組NAG-1水平較正常對(duì)照組升高（P<0.05），AP+雙氯芬酸鈉組較AP組升高（P<0.05）。在血漿、胰腺和肺組織中，AP組NAG-1mRNA和蛋白表達(dá)水平較正常對(duì)照組不同程度升高（P<0.0