鳥苷延遲給藥對缺血性腦卒中的治療作用及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、第一部分鳥苷延遲給藥對缺血性腦卒中梗死體積和行為學(xué)的影響
　　目的:多個離體和在體研究已經(jīng)表明鳥苷對急性缺血性腦卒中具有神經(jīng)保護(hù)作用，但延遲給藥（腦卒中后24h給藥）對腦卒中功能恢復(fù)的影響尚未有人研究。本研究利用光化學(xué)腦梗死模型，在腦卒中后24h給藥，研究鳥苷對腦梗死體積和行為學(xué)的影響。
　　方法:16只C57/B6J小鼠隨機(jī)分為兩組，建立光化學(xué)腦梗死模型，于建模后24h分別予以腹腔注射鳥苷（8mg/kg）和生理鹽水，并連續(xù)

2、給藥7天，每天一次。分別于建模前1天和建模后第1,3,7,14,28天行行為學(xué)檢測，包括改良神經(jīng)嚴(yán)重性量表（mNSS）評分、轉(zhuǎn)棒試驗、Corner試驗和Cylinder試驗等。另取8只C57/B6J小鼠，亦隨機(jī)分為鳥苷治療組和生理鹽水兩組，建立光化學(xué)腦梗死模型，于建模后第7天時斷頭取腦，行尼氏染色，測定腦梗死體積。
　　結(jié)果:兩組小鼠在建模前均無明顯神經(jīng)功能缺損，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。建模后一天，兩組均表現(xiàn)出明顯的神經(jīng)功能障礙，差異無

3、統(tǒng)計學(xué)意義。兩組在建模后第3天到第28天，神經(jīng)功能缺損均表現(xiàn)出逐漸的恢復(fù)，但在第3、7天無統(tǒng)計學(xué)差異，于第14天開始與對照組相比，鳥苷可促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)。兩組在梗死后第7天時的梗死體積無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:鳥苷延遲給藥不影響缺血性腦卒中急性期的梗死體積和行為學(xué)表現(xiàn)，但可促進(jìn)卒中后的長期功能恢復(fù)。
　　第二部分鳥苷延遲給藥促進(jìn)腦梗死后的神經(jīng)再生和血管生成
　　目的：研究鳥苷延遲給藥是否可以促進(jìn)缺血性腦卒中后小鼠

4、的神經(jīng)再生、血管生成及神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、VEGF的表達(dá)。
　　方法：C57B6/J小鼠在行光化學(xué)腦梗死造模后隨機(jī)分為兩組，治療組在造模24小時后予以腹腔注射鳥苷（8mg/kg），連續(xù)7天，對照組給予等體積生理鹽水。分別于造模7天、14天及28天后處死動物，免疫熒光染色定量側(cè)腦室室管膜下區(qū)和海馬齒狀回顆粒下區(qū) BrdU及 BrdU/DCX雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)目，梗死周邊區(qū)BrdU/NeuN雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)、微血管密度及 BrdU/vWF

5、雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)。行Western Blot檢測卒中7天、14天及28天后缺血側(cè)大腦皮質(zhì)內(nèi)BDNF和VEGF的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果：鳥苷延遲給藥顯著增加卒中后7天、14天及28天時室管膜下區(qū)和顆粒下區(qū) BrdU陽性及 BrdU/DCX雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)，增加14天及28天時梗死周邊BrdU/NeuN雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)、微血管密度及BrdU/vWF雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)。同時，Western Blot顯示，鳥苷治療組卒中后7天、14天和28天時BD

6、NF及7天、14天時VEGF蛋白表達(dá)較對照組顯著增加。
　　結(jié)論：鳥苷延遲給藥可促進(jìn)缺血性腦卒中后神經(jīng)再生及血管生成，增加 BDNF和VEGF的表達(dá)，從而改善卒中后長期神經(jīng)功能。
　　第三部分鳥苷延遲給藥對缺血性腦卒中后膠質(zhì)細(xì)胞活化的調(diào)節(jié)作用
　　目的：缺血性腦卒中后伴隨著星形膠質(zhì)細(xì)胞增生、膠質(zhì)瘢痕的形成和小膠質(zhì)細(xì)胞激活、炎癥反應(yīng)啟動和維持，同時這些病理生理過程也是腦卒中藥物作用的靶點。小膠質(zhì)細(xì)胞在卒中后存在兩種活化狀

7、態(tài)（M1和M2），分別具有加重神經(jīng)損傷和促進(jìn)組織修復(fù)的作用。在本部分我們研究卒中后鳥苷延遲給藥是否影響星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞的激活來發(fā)揮神經(jīng)修復(fù)作用。
　　方法：建立光化學(xué)腦梗死小鼠模型，卒中后24小時后予以鳥苷治療（每天8mg/kg），持續(xù)7天。腦梗死造模28天后處死小鼠，應(yīng)用免疫熒光方法對星形膠質(zhì)細(xì)胞（GFAP染色陽性）、小膠質(zhì)細(xì)胞（Iba-1陽性）進(jìn)行計數(shù)。缺血側(cè)大腦皮質(zhì)行熒光定量PCR，檢測腦內(nèi)相關(guān)炎癥因子和細(xì)胞因子的m

8、RNA表達(dá)量。
　　結(jié)果：與對照組相比，鳥苷治療組梗死后28天時SVZ區(qū)GFAP陽性細(xì)胞數(shù)增多，但梗死周邊區(qū)GFAP陽性細(xì)胞數(shù)及Iba-1陽性細(xì)胞數(shù)均降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。鳥苷治療顯著降低缺血側(cè)大腦皮質(zhì)M1標(biāo)志物iNOS、CD16、IL-1β、CD32的mRNA水平，而升高 M2標(biāo)志物 CD206、IL-10、Arg1、Ym1的mRNA水平。
　　結(jié)論：鳥苷延遲給藥可抑制缺血性卒中后梗死周邊的星形膠質(zhì)反應(yīng)