老年患者體外循環(huán)心臟手術(shù)術(shù)后認(rèn)知功能障礙相關(guān)易感基因篩選的研究.pdf

1、背景：
　　術(shù)后認(rèn)知功能障礙（postoperative cognitive dysfunction，POCD）是許多重大手術(shù)，特別是心臟手術(shù)患者術(shù)后常見的并發(fā)癥，常表現(xiàn)為焦慮、精神紊亂、人格的改變、注意力下降以及記憶受損等。相關(guān)研究表明POCD在非心臟手術(shù)和心臟手術(shù)后均有可能發(fā)生，在心臟手術(shù)后，特別是體外循環(huán)（cardiopulmonary bypass,CPB）心臟手術(shù)后POCD的發(fā)生率高達(dá)83％。這種認(rèn)知能力的改變可持續(xù)幾天

2、至幾周，少數(shù)患者可持續(xù)至數(shù)月甚至更長(zhǎng)時(shí)間。由于POCD可導(dǎo)致患者術(shù)后并發(fā)癥和病死率增加、減緩患者康復(fù)速度、大大延長(zhǎng)住院天數(shù)、增加了患者及其家屬的經(jīng)濟(jì)和精神上的負(fù)擔(dān)，甚至?xí)绊懟颊叱鲈汉蟮纳钯|(zhì)量，因此越來越受到全世界的關(guān)注。圍術(shù)期神經(jīng)功能損傷的病因很多，關(guān)于遺傳因素對(duì)認(rèn)知功能下降的影響方面的研究雖尚處于初步階段，但仍提示基因可能起到了一定的調(diào)控作用。有些學(xué)者認(rèn)為單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphis,

3、SNP）會(huì)影響POCD的易感性，目前這方面的研究才剛剛起步，多以先設(shè)定一個(gè)或幾個(gè)候選基因，再針對(duì)性地探討候選基因與POCD間關(guān)聯(lián)的方式為主，尚未采用全基因組關(guān)聯(lián)研究（Genome Wide Association Studies, GWAS）的方法在全基因組的范圍研究與 POCD相關(guān)的SNPs。為此，我們?cè)O(shè)計(jì)了以下臨床試驗(yàn)。
　　目的：
　　1.對(duì)年齡≥60歲的行CPB下心臟手術(shù)的患者進(jìn)行術(shù)后POCD評(píng)估，并采集DNA行GW

4、AS分析，篩查與POCD發(fā)生相關(guān)的SNPs位點(diǎn)；
　　2.分析篩選出的與POCD的相關(guān)的SNPs，為下一步針對(duì)性探討某個(gè)SNP位點(diǎn)對(duì)POCD遺傳易感性影響的大樣本研究做準(zhǔn)備。
　　方法：
　　選取年齡≥60歲擬在CPB下行心臟手術(shù)的患者，完善術(shù)前檢查和準(zhǔn)備后，于術(shù)前1天和術(shù)后第7天用簡(jiǎn)易精神狀態(tài)量表（Mini--MentalStateExamination,MMSE）進(jìn)行認(rèn)知功能評(píng)估，并于術(shù)前采集4ml靜脈血，用乙二胺

5、四乙酸（ethylenediaminetetraaceticacid,EDTA）抗凝置于--80°冰箱保存。根據(jù)術(shù)前和術(shù)后的MMSE評(píng)分將患者分成 POCD組和非 POCD組。將所有患者的血液樣本提取DNA后用基因芯片進(jìn)行基因測(cè)序，檢測(cè)出的所有SNPs行哈迪--溫伯格定律吻合度檢驗(yàn)，濾掉哈迪--溫伯格P值（Hardy--WeinbergPvalue,Hwpval）<0.05，最小等位基因頻率（minorallelefrequency,M

6、AF）<0.05的位點(diǎn)，篩選出與POCD關(guān)聯(lián)度P值最小的50個(gè)SNPs位點(diǎn)，再通過網(wǎng)站查詢這些位點(diǎn)及其所在基因的詳細(xì)信息，選擇最可能影響POCD的基因和SNPs，與POCD的發(fā)生進(jìn)行危險(xiǎn)度分析。
　　結(jié)果：
　　65例患者納入最終分析，其中發(fā)生POCD的為20人，未發(fā)生POCD的為45人，兩組間在年齡、身高、體重、術(shù)前MMSE評(píng)分、吸煙、合并疾病等方面沒有明顯差異（P>0.05）。發(fā)生POCD的患者中男性所占比例較未發(fā)生PO

7、CD的明顯增多（P<0.05）。通過基因芯片共檢測(cè)了93,994個(gè)SNPs，經(jīng)數(shù)據(jù)質(zhì)控和關(guān)聯(lián)度分析，從中選取了關(guān)聯(lián)度P值最小的50個(gè)SNPs。通過Hapmap網(wǎng)站（http://www.hapmap.org）、Human gene database（http://www.genecards.org）和pubmed網(wǎng)站（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp）查詢這些SNPs及其所在基因的信息，最后篩選出 ITPR