人附睪蛋白4(HE4)作為新型腫瘤標(biāo)志物在小細胞肺癌應(yīng)用的初步研究.pdf

1、在多數(shù)發(fā)達國家和發(fā)展中國家中，肺癌的發(fā)病率和死亡率均處于惡性腫瘤的第一位。在中國，肺癌的死亡人數(shù)占所有癌癥死亡總數(shù)的20％，在全世界發(fā)病率和死亡率最高。肺癌分為非小細胞肺癌（NSCLC）和小細胞肺癌（SCLC）兩種類型。其中SCLC的發(fā)病率占所有肺癌總數(shù)的13%到20%，其發(fā)生與吸煙的強度和持續(xù)時間密切相關(guān)。小細胞肺癌的特點是發(fā)展迅速、侵襲性強、常伴有副腫瘤綜合癥和早期轉(zhuǎn)移。所以小細胞肺癌診斷時大多處于晚期，預(yù)后差。運用更敏感的檢測方法

2、盡量早期發(fā)現(xiàn)癌腫，成為改善小細胞肺癌預(yù)后的關(guān)鍵因素之一。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)小細胞肺癌患者許多血清腫瘤標(biāo)志物都會升高。其中，廣泛應(yīng)用于臨床的神經(jīng)特異性烯醇化酶（NSE）敏感性較好但特異性不夠，其他血清腫瘤標(biāo)志物也存在敏感性或特異性不高問題。因此，臨床上對于小細胞肺癌的早期診斷、病情進展及療效監(jiān)測迫切需要一種更可靠的新型腫瘤標(biāo)志物。
　　人類附睪蛋白4（HE4）是一種分泌型的小分子糖蛋白，首次發(fā)現(xiàn)于人類的附睪上皮。已被美國聯(lián)邦食品藥品

3、管理局批準(zhǔn)作為新型血清腫瘤標(biāo)志物用于卵巢癌的早期診斷和復(fù)發(fā)監(jiān)測。近來的一些小樣本的研究發(fā)現(xiàn)，在肺癌腫瘤組織和肺癌患者血清中HE4均有較高的表達，并且高濃度水平的血清HE4和患者不良的預(yù)后相關(guān)。血清HE4用于鑒別肺癌、肺結(jié)核及健康人具有很大的應(yīng)用前景。到目前為止還沒有一項較大樣本量的研究專門針對HE4在小細胞肺癌患者上是否高表達，并探索其對于小細胞肺癌臨床研究、診斷和治療的意義。
　　本課題旨在評估 HE4在小細胞肺癌的血清表達水平

4、及其對于小細胞肺癌診斷、預(yù)后評估的臨床意義。
　　第一部分，HE4在小細胞肺癌患者血清中表達水平檢測。通過應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測小細胞肺癌患者（N=49）及健康對照組（N=30）的血清中HE4濃度值，我們發(fā)現(xiàn)，小細胞肺癌患者組中HE4的表達水平明顯高于健康對照組中HE4的表達水平（98.93 pmol/L[36.63-1782] vs.49.06 pmol/L[34.86-194.8], p=0.0093）。HE4表達水平與腫瘤的

5、分期無顯著的相關(guān)性，即：局限期和廣泛期（93.41 pmol/L[36.63-834.7] vs.103.3 pmol/L[38.99-1782], p=0.5896）。性別和吸煙強度因素對HE4血清中的表達水平?jīng)]有顯著性影響，即：吸煙者和不吸煙者（95.78 pmol/L[36.63-1782] vs.113.5 pmol/L[38.99-834.7], p=0.9775）；女性和男性（102.1 pmol/L[38.99-194.4

6、] vs.95.78 pmol/L[36.63-1782], p=0.5305）。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測到HE4在肺癌組織中高表達，而在正常肺組織中則無表達。
　　第二部分， HE4與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測。我們用接受者操作特征曲線（ROC）方法確定HE4的cut-off值，計算HE4的敏感性和特異性。以84.19 pmol/L為cut-off值時ROC曲線下面積（AUC）達0.85，具有最佳的敏感性和特異性，分別為69.

7、4%，93.3%。應(yīng)用HE4同份血清檢測了其他已在臨床廣泛應(yīng)用的肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物，如癌胚抗原、糖蛋白125、糖蛋白153、糖蛋白199、糖蛋白274、細胞角蛋白21-1、鱗狀上皮癌抗原及神經(jīng)特異性烯醇化酶（NSE）。8種腫瘤標(biāo)志物中，CEA（γ=0.4133，p=0.4133），CA125（γ=0.408，p=0.408）和CYFRA21-1（γ=0.4783，p=0.4783），顯示與血清HE4有相關(guān)。另外，以本研究所確定的cut-

8、off值（>84.19 pmol/L）為標(biāo)準(zhǔn)，在其他肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物診斷為陰性{CA125（<35 U/mL），CEA（<5.0 ng/mL），CA199（<37 U/mL），CA153（<30 U/mL），CA724（<10 U/mL），CYFRA21-1（<4.0 ng/mL），SCC（<1.8 ng/mL），NSE（<24.0 ng/mL）}的患者中，血清HE4為陽性的有23/36（63.9%），24/37（64.9%），25/

9、37（67.6%），22/33（66.7%），32/43（74.7%），29/43（67.4%），33/47（70.2%），25/37（67.6%）。單獨應(yīng)用一種腫瘤標(biāo)志物，HE4的敏感性和準(zhǔn)確性最高，分別達69.4%和78.5%， NSE的特異性最高，達100%。HE4與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合可以進一步提高敏感性和準(zhǔn)確性，在各種聯(lián)合中HE4和NSE聯(lián)合其敏感性和準(zhǔn)確性可達75.5%和82.3%，相對于單獨使用NSE僅僅特異性有輕微下降，為

10、93.3%。
　　第三部分，HE4與小細胞肺癌預(yù)后、生存曲線的相關(guān)性。通過對31例完成隨訪的患者生存曲線分析，結(jié)果顯示，按局限期/廣泛期、HE4高表達/低表達分組，組間沒有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異，但有血清中HE4高表達的廣泛期小細胞肺癌患者具有預(yù)后較差的趨勢。
　　第四部分，通過Meta分析探討血清HE4蛋白在肺癌中的診斷價值。從Pubmed， Embase，谷歌學(xué)術(shù)，中國知網(wǎng)等網(wǎng)站進行文獻檢索，最終篩選出48篇文獻，使用統(tǒng)計軟件

11、對相關(guān)文獻進行系統(tǒng)回顧。共有8篇文獻，1447個研究對象納入本 meta分析中。其中，有867個病例和580個對照，異質(zhì)性分析發(fā)現(xiàn)，入組研究的靈敏度，特異度，陽性預(yù)測值，陰性預(yù)測值的I2值分別為78.3%（P<0.001），73.2%（P<0.001），56.9%（P=0.017），63.2%（P=0.002）。ROC曲線下面積為0.8639。Meta分析表明，血清HE4在肺癌診斷中具有重要的作用。
　　綜上所述，與健康人相比，H

12、E4在小細胞肺癌血清和腫瘤組織中均有較高水平的表達。ROC曲線分析顯示檢測血清HE4水平有從人群中篩查出SCLC患者的潛力，且與現(xiàn)有的同級別特異性腫瘤標(biāo)志物相比具有最好的敏感性。現(xiàn)有的臨床檢查條件可以較容易地檢測血清 HE4，因此，本課題的研究有力地表明，血清 HE4可作為潛在的新型腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用于小細胞肺癌的診斷。
　　本課題因時間等條件所限，只是初步證明了HE4在SCLC診斷中初步的應(yīng)用價值，但并未涉及HE4在SCLC中具體的

13、生物學(xué)效應(yīng)及作用的分子機制，而其具體分子機制研究對于孕育新的研發(fā)思路、找到相應(yīng)有效的藥物作用靶點，改善患者總生存期極為關(guān)鍵。本課題后續(xù)研究將著重從以下方面進一步研究：
　　1.采用HE4特異的中和抗體抑制HE4水平，結(jié)合蛋白組學(xué)分析明確HE4可能的作用途徑。
　　2.構(gòu)建HE4酶活性缺失突變體基因，明確HE4酶活性在介導(dǎo)TGF-β調(diào)控中的作用。
　　3.建立HE4高表達、穩(wěn)定沉默表達或敲除表達的肺癌細胞系，進一步明確H

14、E4促肺癌細胞EMT效應(yīng)，并以EMT（Epithelial to Mesenchymal Transition，EMT）驗證。并檢測相關(guān)基因表達以明確TGF-β及相關(guān)信號通路（Smad依賴和非依賴通路）在HE4促肺癌細胞EMT中的作用，闡明HE4酶活性在調(diào)控TGF-β表達及促EMT中的作用。
　　4.以上述細胞系建立裸鼠肺癌模型，檢測上述指標(biāo)以驗證體外發(fā)現(xiàn)，并考察抑制或阻斷HE4表達對于肺癌治療的效應(yīng)。
　　5.通過收集人S