淫羊藿苷對內(nèi)皮素誘導(dǎo)的大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究淫羊藿苷（icariin，ICA）對內(nèi)皮素（endothelin，ET-1）誘導(dǎo)的大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞（pulmonary artery smooth muscle cell，PASMC）增殖的影響，并探討其抗增殖效應(yīng)與PI3K-AKT-eNOS-NO-sGC-cGMP信號通路的關(guān)系。
　　方法：采用組織塊貼壁法培養(yǎng)SD雄性大鼠PASMC，并將其分為空白組、模型組（ET-1200 nmol·L-1）、ICA-L、ICA-

2、M、ICA-H組（ET-1200 nmol·L-1+ICA10-8、10-7、10-6 mol·L-1）和溶媒組（DMSO，0.1％），ET-1提前2h加入誘導(dǎo)PASMC增殖模型，ICA作用48 h。MTT比色法、BrdU熒光標(biāo)記法觀察ICA（10-8、10-7、10-6 mol·L-1）對ET-1（200 nmol·L-1）所誘導(dǎo)的PASMC增殖的影響， AnnexinV-FITC試劑盒檢測ICA對PASMC凋亡的影響。在證實(shí)ICA具

3、有抗PASMC增殖作用的基礎(chǔ)上，采用PI3K抑制劑LY294002（LY）、eNOS抑制劑L-NAME和sGC抑制劑NS2028干擾PI3K-AKT-eNOS-NO-sGC-cGMP信號通路，以分析ICA抗PASMC增殖作用與該通路的關(guān)系，分組如下：①空白組、模型組（ET-1200 nmol·L-1）、ICA-H組（ET-1200 nmol·L-1+ICA10-6 mol·L-1）、LY組（LY5μmol·L-1）、ICA+LY組（ET

4、-1200 nmol·L-1+ICA10-6 mol·L-1+LY5μmol·L-1）；②空白組、模型組（ET-1200 nmol·L-1）、ICA-H組（ET-1200 nmol·L-1+ICA10-6 mol·L-1）、L-NAME組（ET-1200 nmol·L-1+L-NAME100μmol·L-1）、ICA+L-NAME組（ET-1200 nmol·L-1+ICA10-6 mol·L-1+L-NAME100μmol·L-1）；

5、③空白組、模型組（ET-1200 nmol·L-1）、ICA-H組（ET-1200 nmol·L-1+ICA10-6 mol·L-1）、NS2028組（ET-1200 nmol·L-1+NS202850μmol·L-1）、ICA+NS2028組（ET-1200 nmol·L-1+ICA10-6 mol·L-1+NS202850μmol·L-1），各抑制劑和ET-1提前2 h加入，ICA作用48 h。MTT比色法、BrdU熒光標(biāo)記法觀察各

6、抑制劑對ICA抗PASMC增殖作用的影響，Western Blot檢測p-AKT、AKT、p-eNOS和eNOS蛋白的表達(dá)；比色法試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中NO的含量，ELISA試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中cGMP的含量。
　　結(jié)果：MTT比色法和BrdU熒光標(biāo)記法結(jié)果顯示，ET-1（200 nmol·L-1）能促進(jìn)PASMC增殖（P＜0.01），ICA各劑量組均能抑制ET-1所致的PASMC增殖（P＜0.01），并呈劑量依賴性，ICA對P

7、ASMC凋亡無明顯影響。ICA的抗PASMC增殖作用可被LY、L-NAME和NS2028所拮抗。WB結(jié)果顯示，模型組p-AKT的蛋白表達(dá)量明顯低于空白組， LY的加入進(jìn)一步抑制了p-AKT的蛋白表達(dá)， ICA10-6 mol·L-1能提高p-AKT的蛋白表達(dá)量，與LY合用后作用被拮抗。p-eNOS是p-AKT下游靶蛋白eNOS的磷酸化產(chǎn)物，具有與p-AKT相同的變化趨勢。L-NAME能夠抑制eNOS的活化，使L-NAME組p-eNOS蛋

8、白表達(dá)量顯著低于模型組，并能拮抗ICA促p-eNOS蛋白表達(dá)的作用。由比色法結(jié)果可知，NO含量與p-eNOS的蛋白表達(dá)量同增同減。ELISA結(jié)果顯示，cGMP的含量受NO的影響，模型組cGMP濃度均小于空白組，LY、L-NAME和NS2028均可進(jìn)一步降低cGMP的水平，并能抑制 ICA促cGMP釋放的效應(yīng)。
　　結(jié)論：ICA能抑制由ET-1誘導(dǎo)的PASMC的增殖；ICA抑制由ET-1誘導(dǎo)的PASMC的增殖與激活PI3K-AKT-