江蘇省耐多藥結(jié)核分枝桿菌分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　研究江蘇省耐多藥結(jié)核分枝桿菌(MDR-TB)的分子流行病學(xué)特征。
　　(1)建立以結(jié)核分枝桿菌分散重復(fù)單元一數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列(mycobacterialinterspersed repetitive units-variable number tandem repeats，以下簡稱MIRU-VNTR)方法為基礎(chǔ)的結(jié)核分枝桿菌基因分型系統(tǒng)，通過MIRU-VNTR，分析江蘇省不同地區(qū)MDR-TB的遺傳品系和流行優(yōu)

2、勢(shì)菌株，建立MDR-TB基因組多態(tài)性數(shù)據(jù)庫。
　　(2)評(píng)價(jià)MIRU-VNTR分型方法在MDR-TB流行病學(xué)中的應(yīng)用，描述江蘇省耐多藥結(jié)核分枝桿菌的基因型分布及成簇特征，并與非MDR-TB基因型分布及成簇特征進(jìn)行比較。分析MDR-TB菌株基因型與耐藥基因突變間的關(guān)聯(lián)性，了解結(jié)核桿菌耐藥基因突變可能對(duì)菌株的遺傳進(jìn)化產(chǎn)生影響。
　　方法:
　　選取2008年江蘇省耐藥監(jiān)測(cè)項(xiàng)目獲得的235株MDR-TB菌株作為研究對(duì)象，并隨

3、機(jī)選取272株非MDR菌株作為對(duì)照組，MDR-TB組與非MDR-TB組比例為1∶1.2。采用國際通用的標(biāo)準(zhǔn)MIRU-VNTR24位點(diǎn)對(duì)納入的全部結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行基因型檢測(cè)，并采用HAIN線性探針技術(shù)對(duì)MDR-TB利福平和異煙肼的耐藥突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。MIRU-VNTR數(shù)據(jù)通過網(wǎng)站http://www.miru-vntrplus.org進(jìn)行聚類分析，并采用非參數(shù)檢驗(yàn)比較兩組的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并對(duì)成簇菌株的耐藥突變信息進(jìn)行比較分析。
　　

4、結(jié)果:
　　對(duì)MDR-TB和非MDR-TB的MIRU-VNTR的基因多態(tài)性進(jìn)行比較，得出235株MDR分為206個(gè)基因型，其中185個(gè)獨(dú)特性，有17個(gè)基因型有兩株，3個(gè)基因型有3株，1個(gè)基因型有7株。成簇率為21.3％(50/235)。272株非MDR分為229個(gè)基因型，其中210個(gè)獨(dú)特性，11個(gè)基因型含2株，4個(gè)基因型含3株，2個(gè)基因型含4株，1個(gè)基因型含7株，1個(gè)基因型含13株，成簇率為22.8％(62/272)，比較MDR菌

5、株與非MDR菌株兩組的成簇率，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=0.169，p值為0.681），提示MDR與非MDR在聚集性上并沒有明顯差異。
　　MIRU-VNTR24位點(diǎn)對(duì)235株MDR-TB和272株非MDR-TB進(jìn)行基因檢測(cè)，采用非參數(shù)檢驗(yàn)比較發(fā)現(xiàn)兩組在24個(gè)位點(diǎn)的分布上并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，計(jì)算每個(gè)位點(diǎn)的分辨率指數(shù)，并挑選了分辨率指數(shù)大于0.3的13個(gè)位點(diǎn)，另外兩組比較P值小于0.1的一個(gè)位點(diǎn)，共14的位點(diǎn)，分別為:ETRA、ETRE、MI

6、RU10、MIRU23、MIRU26、MIRU39、MIRU40、Mtub04、Mtub21、Mtub30、Mtub39、Oub11b、Qub26、Qub4156c。比較兩組24個(gè)位點(diǎn)與14個(gè)位點(diǎn)的分辨率分別為MDR-24分辨率為0.9982，非MDR-24為0.9964，MDR-14為0.9958，非MDR-14為0.9967。篩選的14個(gè)位點(diǎn)的分辨能力與24個(gè)位點(diǎn)無顯著差異。
　　采用HAIN線性探針技術(shù)快速檢測(cè)方法對(duì)235株

7、MDR進(jìn)行了利福平耐藥基因(rpoB)和異煙肼耐藥基因(katG、inhA)的突變情況檢測(cè)，獲得MDR-TB耐藥基因突變類型，對(duì)成簇的結(jié)核分枝桿菌耐藥突變位點(diǎn)進(jìn)行進(jìn)一步的分析發(fā)現(xiàn)成簇的結(jié)核分枝桿菌其耐藥突變位點(diǎn)并不相似，提示菌株是否成簇與其耐藥突變無直接關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)論:
　　江蘇省MDR-TB與非MDR-TB在基因多態(tài)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)核分枝桿菌成簇性與耐藥基因無相關(guān)性?，F(xiàn)行的普通結(jié)核病防治策略可適用于耐多藥結(jié)核病的防治。