調(diào)節(jié)性T細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生IL-10抑制自身抗體分泌參與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病.pdf

1、目的:
　　本課題擬通過(guò)實(shí)驗(yàn)明確RA患者Treg細(xì)胞比例、IL-10、IgM和IgG含量，并在體外條件下證明Treg通過(guò)分泌IL-10抑制B細(xì)胞分化及自身抗體分泌，從而揭示類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞減少，無(wú)法通過(guò)分泌足量IL-10抑制自身抗體分泌是其疾病發(fā)生發(fā)展的重要因素之一，也為RA治療提供理論依據(jù)和重要靶點(diǎn)。
　　方法:
　　1.研究對(duì)象:參照美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1987年修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)，選擇本醫(yī)院收治的R

2、A患者20例。對(duì)照組為同期該院體檢健康人群20例，注意盡量保證年齡、性別相匹配。
　　2.樣本收集和處理:收集RA患者和HC對(duì)照者空腹血樣10ml，以肝素鋰抗凝，分離血漿凍存，并采用Ficoll分離法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，備用。
　　3.血漿IL-10水平的檢測(cè):采用人IL-10ELISA檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)血漿IL-10含量。
　　4.血漿IgM、IgG濃度檢測(cè):采用人IgM、IgG ELISA檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)血漿IgM

3、、IgG含量。
　　5.CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例檢測(cè):采用多色熒光抗體結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)并分析樣本中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例。
　　6.Treg細(xì)胞抑制B細(xì)胞分化:采用流式分選RA患者CD4+CD25+T細(xì)胞和na(i)veB細(xì)胞，兩者共培養(yǎng)后，檢測(cè)CD19+IgD-CD38+CD27+漿細(xì)胞比例和IgM、IgG mRNA表達(dá)水平。
　　7.IL-10抗體阻斷Treg細(xì)胞抑制

4、B細(xì)胞分化:在CD4+CD25+T細(xì)胞和na(i)ve B細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，加入IL-10抗體，檢測(cè)CD19+IgD-CD38+CD27+漿細(xì)胞比例和IgM、IgGmRNA表達(dá)水平。
　　8.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，兩組間差異比較采用t檢驗(yàn)，各組數(shù)據(jù)陽(yáng)性率比較采用卡方檢驗(yàn)，相關(guān)性采用pearson相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意。
　　結(jié)果:
　　1.標(biāo)本分組情況:R

5、A組共計(jì)20例，HC組共計(jì)20例，性別、年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.RA患者外周血IL-10含量為(32.04±5.96)pg/ml，低于健康對(duì)照者（57.68±13.72）pg/ml，且有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.RA患者外周血IgM含量為(23.25±7.85)IU/ml，高于健康對(duì)照者（13.63±3.44）IU/ml，RA患者外周血IgG含量為(26.89±8.67)IU/ml，高于健康對(duì)照者（13.39±3.96）

6、IU/ml，均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異
　　4.RA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞比例為（5.04±1.58）％，與HC對(duì)照組(9.86±3.89)％相比較，比例明顯降低，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　5.在未加入Treg細(xì)胞時(shí)，漿細(xì)胞比例為(4.31±2.51)％，加入Treg細(xì)胞時(shí)，漿細(xì)胞比例為（1.83±1.23）％，后者顯著低于前者，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;未加入Treg細(xì)胞時(shí)，B細(xì)胞IgM和IgG mRNA表達(dá)量分別為（2

7、.01±0.57）倍和（1.97±0.52）倍，均高于加入Treg細(xì)胞組B細(xì)胞IgM和IgG mRNA表達(dá)量，經(jīng)配對(duì)T檢驗(yàn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　6.未加入IL-10抗體時(shí)，漿細(xì)胞比例為（1.83±1.23）％，加入IL-10抗體時(shí)，漿細(xì)胞比例為(4.73±1.95)，后者顯著高于前者且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;加入IL-10抗體時(shí)，B細(xì)胞IgM和IgG mRNA表達(dá)量分別為（2.17±0.80）倍和(2.08±0.85)倍，均高于未加入IL-