MicroRNA-214介導(dǎo)Claudin-2在人腎小管上皮細(xì)胞缺血再灌注損傷中的作用及機制.pdf

1、目的：
　　研究microRNA-214(miR-214)介導(dǎo)Claudin-2在人腎小管上皮細(xì)胞缺血再灌注損傷中的作用及相關(guān)機制。
　　方法：
　　以人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)為研究對象,建立體外細(xì)胞缺血再灌注損傷模型,根據(jù)是否進(jìn)行缺血再灌注損傷處理將HK-2細(xì)胞分為對照組及缺血再灌注損傷組（IRI組），IRI組按照再灌注后不同時間點（0h、8h、12h、24h、48h）分為5個亞組，并分析各組HK-2細(xì)胞miR-

2、214、Claudin-2 mRNA、Claudin-2蛋白表達(dá)水平及細(xì)胞活性、細(xì)胞凋亡率的動態(tài)變化。再將HK-2細(xì)胞分別進(jìn)行無轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)染 miR-214模擬物（ mimic）、microRNA-214抑制物（inhibitor）、mimic陰性對照（mimicNC）、inhibitor陰性對照（inhibitor NC）處理后進(jìn)行缺血再灌注損傷（IRI）12h，根據(jù)轉(zhuǎn)染物的不同分為5組：無轉(zhuǎn)染IRI組（IRI組）、轉(zhuǎn)染mimic+IR

3、I組（mimic組）、轉(zhuǎn)染inhibitor+IRI組（inhibitor組）、轉(zhuǎn)染mimic NC+IRI組（mimic NC組）及轉(zhuǎn)染inhibitor NC+IRI（inhibitor NC組），并分析各組HK-2細(xì)胞 miR-214、Claudin-2 mRNA、Claudin-2蛋白表達(dá)水平及細(xì)胞活性、細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果：
　?。?）缺血再灌注處理后，隨著時間的推移，各亞組HK-2。
　　細(xì)胞損傷及凋亡逐

4、漸加重，于再灌注12h達(dá)高峰，之后逐漸恢復(fù)；且IRI12h時miR-214表達(dá)水平最高，Claudin-2 mRNA、Claudin-2蛋白表達(dá)水平最低；（2）mimic組 miR-214表達(dá)水平顯著升高，為基線值的1402倍。IRI組、inhibitor組、mimic-NC組、inhibitor-NC組miR-214上升倍數(shù)分別為10.2倍、9.8倍、10.6倍、10.4倍。
　?。?）IRI組、mimic組、inhibitor

5、組、mimicNC組、inhibitorNC組Claudin-2 mRNA下降倍數(shù)分別為。2.27±0.25、4.25±0.63、1.78±0.21、2.31±0.29、2.30±0.31倍，IRI組、mimic組、inhibitor組之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，且mimic組Claudi-2 mRNA表達(dá)水平顯著低于inhibitor組（P<0.05）。
　　（4）IRI組、mimic組、inhibitor組、mimicNC組、

6、inhibitorNC組 Claudin-2蛋白質(zhì)表達(dá)水平分別為0.694±0.072、0.263±0.021、0.860±0.080、0.605±0.062、0.524±0.052；IRI組、mimic組、inhibitor組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且 mimic組表達(dá)水平顯著高于inhibitor組（P<0.05）。
　　（5）IRI組、mimic組、inhibitor組、mimicNC組、inhibitorNC組CCK-8

7、 OD值分別為：0.08±0.011、0.03±0.012、0.13±0.030、0.08±0.010、0.09±0.015，IRI組、mimic組、inhibitor組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，且mimic組OD值顯著低于inhibitor組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（6）IRI組、mimic組、inhibitor組、mimicNC組、inhibitorNC組細(xì)胞凋亡率分別為：（64.2±2.80）％、（78.6±3.10）%、