中獸藥黃芪莖葉散臨床前研究.pdf

1、目的:本課題通過對(duì)中獸藥黃芪莖葉散進(jìn)行臨床前研究，旨在開發(fā)黃芪藥材新的藥用部位，科學(xué)合理地利用黃芪莖葉自然資源，為黃芪莖葉應(yīng)用于中獸藥領(lǐng)域奠定理論基礎(chǔ)，為開發(fā)其藥用價(jià)值提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:（1）黃芪莖葉原料藥材的質(zhì)量研究：采用觀察法、石蠟切片法、顯微鑒別法對(duì)其性狀、組織特征及粉末特征進(jìn)行研究；采用TLC對(duì)其進(jìn)行定性研究；采用藥典法測(cè)定水分、總灰分、浸出物的含量；采用HPLC測(cè)定黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量；采用比色法測(cè)

2、定總皂苷、APS的含量。（2）黃芪莖葉散的藥學(xué)研究：采用藥典法對(duì)黃芪莖葉散處方及制劑工藝進(jìn)行研究；采用單篩分法、烘干法、裝量差異檢查法對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究；根據(jù)獸藥穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)技術(shù)規(guī)范對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行研究。（3）黃芪莖葉散的藥效學(xué)研究：采用倍比稀釋法與藥敏紙片法結(jié)合應(yīng)用來探究其體外抑菌效果；采用ConA與LPS誘導(dǎo)的體外小鼠脾細(xì)胞增值實(shí)驗(yàn)來探究其是否具有免疫功能調(diào)節(jié)作用。（4）黃芪莖葉散的急性毒性試驗(yàn)：經(jīng)過一次給藥后觀察小鼠的毒性反應(yīng)并測(cè)定

3、其LD50并做最大耐受量測(cè)定。
　　結(jié)果:（1）黃芪莖葉原料藥材的質(zhì)量研究：本品性狀：莖呈圓柱形，分枝較多，長(zhǎng)約為50~60 cm，直徑約為0.5~1.5 cm。質(zhì)地堅(jiān)硬，韌性強(qiáng)不易折斷，斷面纖維性強(qiáng)，皮部呈黃綠色，木部呈淡黃色，呈放射狀紋理，有裂隙。葉片呈橢圓形或長(zhǎng)卵圓形，長(zhǎng)約為0.5~1.5 cm，寬約為0.5~1.0 cm，葉片先端鈍尖，截形或具短尖頭，全緣；其托葉呈披針形或三角形。羽狀復(fù)葉互生，呈黃綠色，皺縮；干燥葉片紙質(zhì)

4、，易碎。氣微味甘，嚼之微有豆腥味。鑒別：莖橫切面：表皮細(xì)胞多呈方形，皮層和髓分化不明顯，皮層由厚角組織、薄壁組織組成。維管束中維管柱排列明顯。葉橫切面：上、下表皮細(xì)胞呈類方形，最外層為角質(zhì)層。上下各一層?xùn)艡诮M織且通過主脈。海綿組織細(xì)胞呈類圓形，有草酸鈣簇晶，主脈維管束外韌型，周圍排列著柱鞘纖維，呈環(huán)形；薄壁細(xì)胞中有草酸鈣棱晶，木薄壁細(xì)胞中，偶見草酸鈣簇晶。本品粉末呈黃綠色，其中含有螺紋導(dǎo)管、纖維、草酸鈣簇晶、厚壁細(xì)胞和淀粉粒。薄層色譜斑

5、點(diǎn)清晰、圓整且重復(fù)性較好。黃芪莖葉水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6.24％~12.24%，總灰分為8.21%~10.55%，水溶性浸出物為12.12%~27.30%，醇溶性浸出物為6.89%~10.28%，總皂苷為23.74~26.52 mg·g-1，APS為23.31~45.70 mg·g-1，黃芪甲苷為0.047%~0.18%，毛蕊異黃酮葡萄糖苷為0.21%~0.26%。（2）黃芪莖葉散的藥學(xué)研究：通過5號(hào)藥典篩的粉末重量為96%~99%。外觀色澤

6、均勻，無花紋、色斑。水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6.04%~9.28%。裝量差異均未超出裝量差異限度，且其在加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)下均較穩(wěn)定。（3）黃芪莖葉散的藥效學(xué)研究：黃芪莖葉散提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌和綠膿桿菌四種供試菌的最低抑菌濃度值（MIC值），其中水提物（一年生）為15.6、62.5、31.2、62.5 mg·mL-1；水提物（多年生）為15.6、31.2、31.2、62.5 mg·mL-1；醇提物（一年生）為7.81、31

7、.2、31.2、62.5 mg·mL-1；醇提物（多年生）為7.81、31.2、15.6、62.5 mg·mL-1。最低殺菌濃度值（MBC值）分別為62.5、31.2、125 mg·mL-1、62.5 mg·mL-1。黃芪莖葉散提取物對(duì)ConA誘導(dǎo)的體外小鼠脾細(xì)胞增值試驗(yàn)探究的結(jié)果為，中低劑量組OD值降低，而高劑量組OD值增高。對(duì)LPS誘導(dǎo)的體外小鼠脾細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果為高中劑量組OD值增高，而低劑量組除水提物（一年生）及醇提物（多年生）

8、外，OD值均增高。（4）黃芪莖葉散的急性毒性試驗(yàn)：經(jīng)一次給藥后未能測(cè)出其LD50。在給藥后7日內(nèi)，觀察到小鼠活動(dòng)正常，被毛光澤，眼、鼻、口腔未見異常分泌物，進(jìn)食情況良好，排泄物顏色正常且無一例死亡現(xiàn)象。
　　結(jié)論:（1）黃芪莖葉原料藥材的質(zhì)量研究：本試驗(yàn)采用的方法方便快捷，有較好的可重復(fù)性，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為制定黃芪莖葉原料藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。（2）黃芪莖葉散的藥學(xué)研究：對(duì)黃芪莖葉散，建立切實(shí)可行的質(zhì)量控制方法，包括粒度、外