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文檔簡介
1、本論文的工作分為啞鈴型探針滾環(huán)擴(kuò)增檢測miRNA和新型卟啉化合物的合成與性質(zhì)兩部分。
I.基于啞鈴型DNA探針的指數(shù)滾環(huán)擴(kuò)增高靈敏度等溫檢測miRNA
miRNA在細(xì)胞中的異常表達(dá)與癌癥的產(chǎn)生、發(fā)展有著密切關(guān)系,miRNA現(xiàn)已成為一種新的癌癥治療靶點(diǎn)。由于其穩(wěn)定性差、家族序列同源性高等特點(diǎn),探索高靈敏度、高特異性的miRNA檢測方法一直是科學(xué)家們的目標(biāo)。滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)(RCA)是近年來發(fā)展起來的一項(xiàng)等溫體外核酸擴(kuò)增技術(shù)
2、,選擇性好、靈敏度高且方便快捷,逐漸被應(yīng)用于多種miRNA定量分析。
本文我們設(shè)計(jì)了一種啞鈴型DNA探針,該探針集特異性結(jié)合靶標(biāo)、擴(kuò)增和發(fā)出熒光信號三種功能于一體。利用該探針通過指數(shù)型滾環(huán)擴(kuò)增可以實(shí)現(xiàn)對miRNA樣品的高靈敏度定量檢測,檢出限可達(dá)0.001zmol,并且具有跨越7個(gè)數(shù)量級的較大的動態(tài)檢測范圍。此外,該檢測方法采用等溫?cái)U(kuò)增方式,不需要昂貴的控溫設(shè)備,檢測成本較低。
II.新型卟啉化合物的合成及水溶性陽離
3、子卟啉化合物i-TMPipEOPP的DNA光切割作用研究
由于結(jié)構(gòu)的特殊性,卟啉化合物具有獨(dú)特的光電性質(zhì),在催化、分析化學(xué)、化學(xué)傳感以及癌癥的診斷治療等領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。芘是一種平面的稠環(huán)芳烴,熒光量子率高、熒光壽命長,在溶劑中可發(fā)射出長波長的熒光,在化學(xué)傳感器方面有著重要應(yīng)用。雖然卟啉化合物和芘類化合物在各個(gè)領(lǐng)域中都有廣泛的應(yīng)用,但是鮮少有將二者結(jié)合在一起綜合研究的報(bào)道。本文合成了四種芘卟啉化合物,并利用紅外光譜、質(zhì)譜、核磁
4、氫譜等手段表征了它們的結(jié)構(gòu)。
其次,利用瓊脂糖凝膠電泳法研究了一種水溶性陽離子卟啉i-TMPipEOPP對超螺旋pBR322質(zhì)粒DNA的光切割作用。結(jié)果表明:i-TMPipEOPP對DNA具有較好的光切割作用。在黑暗條件下,i-TMPipEOPP的存在不會對DNA造成損傷;但在光照下較低濃度(0.6μM)即表現(xiàn)出顯著的切割活性,將超螺旋型pBR322 DNA完全轉(zhuǎn)化為缺口型DNA,且反應(yīng)符合假一級動力學(xué)模型。機(jī)理研究表明,i-
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