焦亡在膽紅素誘導(dǎo)的大鼠皮層星型膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)毒性中的作用研究.pdf

1、目的：
　　在原代培養(yǎng)大鼠皮層星型膠質(zhì)中明確焦亡是否參與膽紅素誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷及炎癥反應(yīng)；調(diào)控焦亡是否能抑制膽紅素神經(jīng)毒性，發(fā)揮抗炎保護(hù)作用。
　　在膽紅素腦病大鼠動(dòng)物模型上初步探究抑制焦亡核心環(huán)節(jié)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（caspase1）活化，是否能減輕膽紅素神經(jīng)毒性，改善膽紅素腦病模型鼠的生活能力。
　　方法：
　　原代培養(yǎng)大鼠皮層星型膠質(zhì)細(xì)胞分為膽紅素組、VX-765組、對(duì)照組：Western blo

2、t檢測(cè)細(xì)胞caspase1蛋白和NLRP3蛋白的表達(dá)，改良MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，比色法檢測(cè)細(xì)胞清乳酸脫氫酶(LDH)釋放率，EtBr/EthD2染色法檢測(cè)細(xì)胞膜通透性改變，TUNEL法檢測(cè)染色質(zhì)DNA斷裂，ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)液上清IL-1β和IL-18的水平。
　　建立膽紅素腦病動(dòng)物模型，Western blot檢測(cè)腦組織caspase1蛋白的表達(dá)，ELISA法檢測(cè)炎癥因子IL-1β的水平，免疫熒光染色檢測(cè)腦組織 GFAP蛋白

3、的表達(dá)；VX-765干預(yù)后動(dòng)態(tài)觀察各組新生鼠的神經(jīng)系統(tǒng)臨床表現(xiàn)，記錄新生鼠體重變化評(píng)估生活能力
　　結(jié)果：
　　原代培養(yǎng)大鼠皮層星型膠質(zhì)細(xì)胞，膽紅素干預(yù)6h、12h后，活化型caspase1和NLRP3蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；與膽紅素組相比，VX-765干預(yù)可抑制 caspase1活化（P＜0.05），提高細(xì)胞存活率（P＜0.05），降低LDH釋放率（P＜0.05），減少ErBr攝?。≒＜0.05），而不影響

4、EthD2攝取（P＞0.05），降低細(xì)胞TUNEL染色陽(yáng)性率（P＜0.01），減少培養(yǎng)液上清IL-1β和IL-18的釋放（P＜0.01）。
　　膽紅素腦病動(dòng)物模型，建模后12h，膽紅素組較對(duì)照組，腦組織中活化型caspase1表達(dá)增加（P＜0.05），IL-1β水平增高（P＜0.01），腦組織切片皮層區(qū)星型膠質(zhì)細(xì)胞活化（P＜0.05）。與膽紅素組相比，VX-765組新生鼠建模后異常神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)減少（P＜0.01），生活能力改善（P