蛙皮素受體激活蛋白對脂多糖誘導的人氣道上皮細胞株黏液高分泌的影響.pdf

1、目的：
　　探討蛙皮素受體激活蛋白（BRAP）對脂多糖（LPS）誘導的氣道黏液高分泌的影響及相關作用機制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人氣道上皮 HBE16細胞，給予LPS刺激，構(gòu)建氣道黏液高分泌模型，轉(zhuǎn)染已構(gòu)建好的 pEGFP-N1-BRAP，以空質(zhì)粒載體作為對照，以ROS清除劑DMTU、ERK抑制劑U0126為干預因素。實驗設空白對照組、LPS刺激組、LPS+pEGFP-N1-BRAP組、LPS+pEGFP-N1組、

2、DMTU+LPS組、DMTU+LPS+pEGFP-N1-BRAP組、 DMTU+LPS+pEGFP-N1組、 U0126+LPS組、U0126+LPS+pEGFP-N1-BRAP組、U0126+LPS+pEGFP-N1組。MTT法檢測細胞活性；RT-PCR法檢測黏蛋白（MUC）5AC轉(zhuǎn)錄水平；ELISA法檢測MUC5AC、IL-1β和IL-6蛋白水平；Western blot法檢測 BRAP、p-IΚ Bα、p-ERK、p-p38MAP

3、K蛋白水平；測定活性氧（ROS）含量；激光共聚焦法檢測MUC5AC蛋白表達水平。
　　結(jié)果：
　　（1）給予LPS刺激后，細胞MUC5ACmRNA及蛋白水平明顯增高，ROS含量和炎癥因子IL-1β、IL-6的表達量也明顯增加,同時伴有p-ERK、p-p38MAPK和p-IΚ Bα蛋白表達增高（P值均＜0.01）；（2）細胞過表達 BRAP后，MUC5ACmRNA及蛋白水平、ROS含量、炎癥因子（IL-1β、IL-6）表達量和

4、p-ERK及p-IΚ Bα蛋白水平均明顯降低(P值均＜0.01)；（3）與U0126+LPS組和空質(zhì)粒對照處理組相比，U0126+LPS+pEGFP-N1-BRAP組細胞MUC5AC轉(zhuǎn)錄及蛋白水平降低（P＜0.05），同時p-ERK和p-IΚ B蛋白表達也降低（P＜0.01）。（4）在 DMTU+LPS+pEGFP-N1-BRAP組，MUC5AC轉(zhuǎn)錄及蛋白水平較DMTU+LPS組和空質(zhì)粒對照處理組顯著降低(P＜0.05)，ROS含量降低