Notch3蛋白抑制劑通過激活固有凋亡途徑與紫杉醇在非小細(xì)胞肺癌中的協(xié)同效應(yīng).pdf

1、目的：肺癌是目前人類高發(fā)的腫瘤之一，其中非小細(xì)胞肺癌（non-small-cell lung cancer, NSCLC）是其主要類型。雖然有手術(shù)，多種化療藥物及靶向治療應(yīng)用于其治療，但是其預(yù)后仍然很差。Notch3蛋白在NSCLC中表達(dá)明顯高于正常肺組織，并且與NSCLC的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。肺癌患者因個(gè)體化差異對(duì)常規(guī)化學(xué)藥物治療具有一定的耐藥性，例如紫杉醇和吉西他濱等。而且，Notch信號(hào)在肺癌細(xì)胞的化學(xué)耐藥性中是至關(guān)重要的。因

2、此，本研究探索Notch3蛋白在非小細(xì)胞肺癌中是否與紫杉醇敏感性有關(guān)，并且探討Notch3抑制劑是否通過激活凋亡途徑提高紫杉醇的化療敏感性。
　　方法：本研究培養(yǎng)A549和H1299細(xì)胞，分別檢測(cè)兩種細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性，根據(jù)其對(duì)紫杉醇的敏感性，分別加入含一定不同濃度的紫杉醇長時(shí)間培養(yǎng)后，用Western blot的方法分別檢測(cè)兩種細(xì)胞中Notch3蛋白的表達(dá)，與未處理細(xì)胞進(jìn)行比較。同時(shí)采用MTT方法檢測(cè)Notch3-siRNA和

3、特殊抑制劑GSI（gamma-secretase inhibitor，GSI）協(xié)同紫杉醇較單純應(yīng)用紫杉醇及對(duì)照組對(duì)兩種細(xì)胞增殖的影響。繼而用流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩種抑制劑協(xié)同紫杉醇對(duì)這兩種肺癌細(xì)胞的凋亡作用。繼而繼續(xù)應(yīng)用克隆形成的方法分別檢測(cè)兩種細(xì)胞經(jīng)不同的預(yù)處理后細(xì)胞的克隆形成能力。同時(shí)，分別用兩種抑制劑處理細(xì)胞后，經(jīng)Westernblot的方法分別檢測(cè)兩種細(xì)胞中Notch3蛋白和NICD3（Notch intracellular doma

4、in3，NICD3）以及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，并比較不同組之間的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：Notch3蛋白在兩種細(xì)胞系中顯著過表達(dá)，并且在紫杉醇處理后Notch3表達(dá)升高，表明Notch信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活化。經(jīng)Notch3-siRNA處理后，紫杉醇的IC50較對(duì)照組明顯下降并且經(jīng)GSI處理后，兩種細(xì)胞較單純加入紫杉醇組在24h，48h及72h后，細(xì)胞增殖明顯減少。經(jīng)兩種抑制劑處理后細(xì)胞的凋亡作用明顯增加及克隆形成能力明顯下降。同時(shí)，兩

5、種抑制劑明顯調(diào)控凋亡蛋白的表達(dá)從而影響了紫杉醇對(duì)細(xì)胞的作用。Notch3 siRNA和GSI明顯降低了Notch3蛋白和NICD3的表達(dá)水平。GSI或siRNA處理后伴隨著Bcl-2表達(dá)下調(diào)和Bax表達(dá)水平上調(diào)。
　　結(jié)論：這些結(jié)果表明Notch3蛋白特異性抑制劑調(diào)控凋亡途徑，從而改變紫杉醇誘導(dǎo)的NSCLC細(xì)胞中Notch3蛋白的增加而導(dǎo)致的化學(xué)抗性。這種結(jié)合Notch3蛋白特異性抑制和紫杉醇的方法將可能應(yīng)用于NSCLC的治療。N