HLA-G基因與移植免疫耐受實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、【背景】
　　腎移植后排斥反應(yīng)是影響移植受者存活的重要因素，而長(zhǎng)期應(yīng)用免疫抑制劑有其不可避免的缺點(diǎn)，因此使移植腎產(chǎn)生免疫耐受是移植界的重要課題。人類白細(xì)胞抗原G(human leukocyte antigen-G，HLA-G)作為一種免疫耐受分子，對(duì)母胎耐受及正常妊娠有著極其重要的作用，而其在器官移植中的作用也逐漸被發(fā)現(xiàn)，移植術(shù)后患者體內(nèi)HLA-G的表達(dá)已被證實(shí)可以降低排斥反應(yīng)的發(fā)生率。通過(guò)向大鼠移植腎轉(zhuǎn)染HLA-G基因使其在移植

2、腎內(nèi)高表達(dá)，有望成為誘導(dǎo)移植腎免疫耐受的新途徑。
　　【目的】
　　本實(shí)驗(yàn)擬向大鼠移植腎中轉(zhuǎn)染HLA-G基因并將轉(zhuǎn)染過(guò)基因的移植腎移植到受體大鼠上，通過(guò)檢測(cè)大鼠移植腎的病理變化以及HLA-G基因的表達(dá)情況，反應(yīng)出移植腎通過(guò)轉(zhuǎn)染HLA-G基因?qū)σ浦残g(shù)后移植腎免疫排斥反應(yīng)的影響，為HLA-G基因誘導(dǎo)移植腎免疫耐受的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)性研究提供有力的研究工具。
　　【方法】
　　分別建立SD大鼠移植實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組為轉(zhuǎn)染過(guò)

3、含有HLA-G基因的慢病毒，陰性對(duì)照組為轉(zhuǎn)染過(guò)不含有HLA-G基因的慢病毒，空白對(duì)照組為灌注液處理的移植腎，然后分別將三組移植腎通過(guò)建立動(dòng)靜脈袖套的方法將移植腎移植到受體腎動(dòng)靜脈上，同時(shí)將移植腎膀胱瓣膜縫合到受體膀胱壁上完成大鼠腎移植模型的建立。建模成功后分別于造模后一周開始，每周三組隨機(jī)選取三只大鼠，麻醉后沿腹正中切開觀察移植腎變化，處死并取出移植腎，部分放-80℃保存，其余甲醛固定。然后分別對(duì)三組移植腎組織進(jìn)行HE染色分析移植腎病理

4、變化，免疫組化以及Western blot分析HLA-G基因的表達(dá)情況，分析出轉(zhuǎn)染HLA-G基因?qū)Υ笫笠浦材I的免疫排斥反應(yīng)的影響。
　　【結(jié)果】
　　共建立大鼠腎移植模型30只，死亡3只，成功率90%，其中2只死于出血，一只死于尿瘺。通過(guò)對(duì)三組移植腎的病理分析發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組排斥反應(yīng)明顯，而實(shí)驗(yàn)組排斥反應(yīng)明顯低于對(duì)照組，同時(shí)免疫組化及Western blot分析HLA-G基因的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組均不表達(dá)HLA-G基因，而實(shí)驗(yàn)組