基于糖肽類抗生素親和作用的化學(xué)發(fā)光法檢測革蘭氏陽性菌.pdf

1、革蘭氏陽性菌是一類威脅人類和動物健康最主要的致病菌。其中金黃色葡萄球菌可以造成食物中毒，敗血癥，膿毒癥等嚴(yán)重危害；蠟樣芽孢桿菌和藤黃微球菌同樣也可以引起食物中毒和嚴(yán)重感染；變異鏈球菌是人類齲病的主要致病微生物，常見于牙菌斑中。鑒于革蘭氏陽性菌對人類，動物的危害，發(fā)展靈敏，簡單，即時的革蘭氏陽性致病菌的檢測新方法對臨床診斷具有重要意義?；瘜W(xué)發(fā)光分析法是一種依據(jù)于體系中待測物濃度與體系的化學(xué)發(fā)光強度在一定條件下呈線性定量關(guān)系的原理，利用儀器

2、對體系化學(xué)發(fā)光強度的檢測，進(jìn)而確定待測物含量的一種痕量分析方法。而生物發(fā)光是一種生物體系中發(fā)生的化學(xué)發(fā)光，它在化學(xué)反應(yīng)過程中會產(chǎn)生可見光。ATP發(fā)光是一種最常見的生物發(fā)光，它的反應(yīng)機理是熒光素酶在熒光素和氧氣的存在下，催化消耗ATP而產(chǎn)生較強的光輻射信號。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴基于萬古霉素的親和作用建立了一種利用生物發(fā)光法檢測革蘭氏陽性菌活菌總量的新型分析策略。本項工作中，萬古霉素作為一種新型分子識別試劑，修飾在羧基化的磁性

3、顆粒上用于從樣品基質(zhì)中快速分離和富集革蘭氏陽性菌。隨后裂解捕獲的細(xì)菌，使三磷酸腺苷從細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)釋放，進(jìn)而通過采集生物發(fā)光反應(yīng)產(chǎn)生的發(fā)光信號來定量檢測革蘭氏陽性菌的活菌總量。實驗結(jié)果表明，四種革蘭氏陽性菌，包括金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、蠟樣芽孢桿菌、變異鏈球菌在1×102-1×107 CFU ml-1范圍內(nèi)均與生物發(fā)光強度呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，其檢測限均為33 CFU mL-1(信噪比=3)。由于革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌死菌對該方法的

4、檢測幾乎沒有干擾，該策略用于檢測活的革蘭氏陽性菌表現(xiàn)出良好的特異性。同時該策略可成功地應(yīng)用于食品和藥物樣品的加標(biāo)回收實驗，所得回收率范圍為72％-120%。該策略具有靈敏度高，成本低，特異性較高，檢測時間短等優(yōu)點，并且在藥品質(zhì)量控制、醫(yī)療衛(wèi)生、食品安全等方面有較好的應(yīng)用潛能。⑵基于化學(xué)發(fā)光分析方法建立了一種利用雙位點分子識別模式檢測變異鏈球菌的新型分析策略。在這項工作中，替考拉寧作為一種新型的分子識別試劑，修飾在羧基化的磁性顆粒上用于識

5、別和捕獲變異鏈球菌。為了進(jìn)一步提高該策略的特異性，利用大鼠免疫球蛋白G2a能夠特異性結(jié)合變異鏈球菌細(xì)胞壁上G蛋白這一特點，我們在大鼠免疫球蛋白 G2a上標(biāo)記辣根過氧化物酶作為第二種分子識別試劑以及信號探針，然后通過采集磁性顆粒捕獲到的變異鏈球菌的化學(xué)發(fā)光信號來定量檢測樣品基質(zhì)中的變異鏈球菌。結(jié)果表明，變異鏈球菌在1×102-1×106 CFU ml-1范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光強度有著良好的線性關(guān)系，檢測限為33 CFU mL-1(信噪比=3)。