晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)及可溶性受體(sRAGE)在冠心病患者冠脈側(cè)支循環(huán)形成中的表達及意義.pdf

1、【背景】:
　　在糖尿病患者的研究中，晚期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end-products，AGEs)與細胞表面的晚期糖基化終產(chǎn)物受體（receptor of advanced glycation end-products，RAGE）相互結(jié)合起著抑制血管增生的作用。動物實驗中也得出相同的結(jié)果[1，2]。但是，循環(huán)中可溶性 RAGE（soluble RAGE，sRAGE）因為能與細胞表面RAGE競爭性結(jié)合

2、AGEs，阻斷細胞表面RAGE與配體結(jié)合，從而sRAGE與AGE相互作用具有促進血管增生及促進冠脈側(cè)支循環(huán)（coronary collateral circulation,CCC）形成的作用[3]。
　　目前，AGEs和sRAGE的研究主要限于糖尿病患者及糖尿病動物模型，尚未發(fā)現(xiàn)在糖尿病以外的人和動物的相關(guān)研究。本研究選擇AGEs和sRAGE的原因是我們前期動物實驗的蛋白芯片檢測所用的動物模型是非糖尿病的側(cè)支循環(huán)形成動物模型，而蛋

3、白芯片結(jié)果卻顯示血漿中RAGE有高表達，可能說明AGEs和sRAGE相互作用不僅存在于糖尿病患者中，也可能廣泛存在于非糖尿病患者中。
　　【目的】:
　　探討AGEs和sRAGE在臨床冠心病患者側(cè)支循環(huán)形成良好與側(cè)支形成不良中的表達水平及可能影響因素，目的是篩選出新的、更強的有促進側(cè)支循環(huán)形成作用的分子生物學(xué)標志物，為冠心病診療提供新方法和理論依據(jù)。
　　【方法】
　　1.前期動物實驗：結(jié)扎大鼠左前降支，建立側(cè)支

4、循環(huán)形成心肌缺血動物模型，用蛋白芯片檢測側(cè)支循環(huán)形成良好組及側(cè)支循環(huán)形成不良組血漿蛋白表達差異，篩選出可能與側(cè)支循環(huán)形成相關(guān)的蛋白因子，本研究主要在臨床病人中擴大樣本量進行驗證檢驗。
　　2.臨床標本采集與資料收集：按常規(guī)方法操作進行冠脈造影（Coronary angiography，CAG），血管穿刺成功后抽取動脈血,加入EDTA-K2抗凝管中。選取2ml全血標本分2管，低溫-80度保存，余下血標本離心后取上層血漿分2管，低溫-

5、80度保存待檢。
　　選取冠脈造影發(fā)現(xiàn)三大主支中至少有一支冠脈大分支(左前降支、左回旋支、右冠)狹窄≥90%的患者，分為冠脈側(cè)支循環(huán)形成良好組、冠脈側(cè)支循環(huán)形成不良組各30例；同時以冠脈造影顯示無冠狀動脈硬化者30例作為對照組。收集研究對象臨床資料輸入 SPSS21.0統(tǒng)計軟件包中，包括患者年齡、性別、入院時血壓、一般生化指標、高血壓史、糖尿病史等等。
　　3.ELISA分析：定量檢測血漿中AGEs及sRAGE的含量，采用雙

6、抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗，操作嚴格按試劑盒說明書進行。
　　4.Western Blotting檢測：另一管中血漿標本用Western Blotting檢測AGEs和sRAGE水平。
　?。?）蛋白濃度測定：用Bradford比色法、紫外分光光度計檢測，于A595處吸光值讀取蛋白含量。
　?。?）蛋白質(zhì)分離：本研究采用12%SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳進行蛋白質(zhì)分離。
　?。?）電轉(zhuǎn)移：本研究采用水浴式電轉(zhuǎn)移。

7、
　?。?）免疫檢測
　　4.統(tǒng)計學(xué)分析：用SPSS21.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，分析側(cè)支循環(huán)形成良好、側(cè)支形成不良及對照組患者血漿中AGE及sRAGE表達水平及差異，并分析其影響因素如心血管病危險因素、性別、年齡、血生化等指標。
　　【結(jié)果】:
　　1.在非糖尿病側(cè)支循環(huán)形成心肌缺血動物模型中，用蛋白芯片檢測發(fā)現(xiàn)血漿 RAGE高表達。
　　2. WB及ELISA驗證檢測結(jié)果均顯示：在糖尿病及非糖尿病患者

8、中，CCC形成良好組與CCC形成不良組的AGEs及sRAGE表達均高于正常對照組。對于糖尿病患者，與對照組相比，CCC形成良好組AGEs及sRAGE（AGEs：0.312±0.018 vs0.192±0.055，sRAGE：0.244±0.103 vs0.161±0.028）；及CCC形成不良組AGEs及sRAGE（AGEs：0.370±0.090 vs0.192±0.055，sRAGE：0.272±0.061 vs0.161±0.02

9、8）的表達水平均明顯升高（P均＜0.05）。同樣，對于非糖尿病患者，與對照組相比，CCC形成良好組AGEs及sRAGE（AGEs：0.361±0.032 vs0.167±0.021，sRAGE：0.235±0.061 vs0.133±0.013）；及 CCC形成不良組 AGEs及 sRAGE（AGEs：0.332±0.138 vs0.167±0.021，sRAGE：0.223±0.055 vs0.133±0.013）的表達水平也明顯升高

10、（P均＜0.05）。
　　而CCC良好組與CCC形成不良組比較，糖尿病及非糖尿病患者的AGEs及sRAGE表達則有所不同，在糖尿病患者，CCC形成良好組AGEs及sRAGE表達有低于CCC形成不良組傾向（AGEs：0.312±0.018 vs0.370±0.090，sRAGE：0.244±0.103 vs0.272±0.061），但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）；而在非糖尿病患者，CCC形成良好組AGEs及sRAGE表達有高

11、于CCC形成不良組傾向（AGEs：0.361±0.032 vs0.332±0.138，sRAGE：0.235±0.061 vs0.223±0.055），但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。
　　3.單因素分析中，男性、高血壓患者、hs-CRP水平越高、頸動脈內(nèi)中膜厚度越厚、頸動脈斑塊大小、冠脈狹窄程度，在三組之間的比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；多因素 Logistic分析：頸動脈斑塊大小、冠脈狹窄程度與側(cè)支循環(huán)形成

12、相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P'＜0.05）。而年齡、吸煙史、糖尿病病史、MPV、脂蛋白a、LDL、膽固醇、甘油三酯水平、左房內(nèi)徑、室間隔厚度、左室后壁厚度、肺動脈高壓、LVEF值與CCC形成無明顯相關(guān)（P＞0.05）。
　　【結(jié)論】:
　　1.在非糖尿病動物試驗中，蛋白芯片顯示側(cè)支循環(huán)形成良好組sRAGE表達增高；
　　2.本組資料顯示：在糖尿病及非糖尿病冠心病患者中，CCC形成良好組與CCC形成不良組血漿AGEs、sR

13、AGE表達均顯著增高，提示AGEs、sRAGE可能與側(cè)支循環(huán)形成相關(guān)；亞組分析顯示，在糖尿病患者中，血漿AGEs、sRAGE表達與CCC分級呈負相關(guān)關(guān)系傾向，而在非糖尿病患者中，AGEs、sRAGE表達與CCC分級呈正相關(guān)關(guān)系傾向，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，其機制不明，是否與樣本量較小有關(guān)，有待進一步研究；
　　3.本組資料顯示：男性、高血壓、hs-CRP水平越高、頸動脈內(nèi)中膜厚度越厚、頸動脈斑塊大小、冠脈狹窄程度，與CCC形成密切相