長鏈非編碼RNA PUNISHER對血管平滑肌細胞作用及其機制探究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩56頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:探究長鏈非編碼RNA PUNISHER對血管平滑肌細胞增殖和凋亡的影響及其與動脈粥樣硬化的關(guān)系?
  方法:12只健康純種雄性4周齡載脂蛋白E(apolipoprotein, ApoE)基因敲除小鼠(ApoE-/-小鼠)通過高脂飼喂制/作動脈粥樣硬化模型小鼠(模型組)12只健康C57BL/6J小鼠飼以基礎(chǔ)飼料為對照組;人體血管平滑肌細胞系(HA-VSMC)根據(jù)轉(zhuǎn)染情況分為小干擾-PUNISHER組和陰性對照(negative

2、 control, NC)組。通過熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)測定模型組與對照組小鼠主動脈弓的PUNISHER表達;通過合成PUNISHER的小干擾RNA作為反向?qū)φ找种芇UNISHER在人血管平滑肌細胞中的表達;應(yīng)用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)驗證PUNISHER表達情況;分別采用細胞計數(shù)試劑盒(cell counting kit-8, cck-8)、劃痕實驗、流式細胞術(shù)及線粒體染色檢測抑制PUNISHER表達對人血管平滑肌細胞增殖、遷移、凋亡和

3、線粒體分裂情況的影響;蛋白印跡法檢測B淋巴細胞瘤-2(B-cell leukemia-lymphoma-2, Bcl-2)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinylaspartae specific proteinase3, caspase3)、caspase8、p-p38、p53、OPA1等蛋白的表達。
  結(jié)果:(1)血脂四項及血管蘇木精-伊紅染色(HE染色)證明動脈粥樣硬化模型制作成功。熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)結(jié)果顯

4、示,動脈粥樣硬化模型小鼠血管的PUNISHER表達高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=9.597, P<0.05);(2)CCK-8法檢測顯示si-PUNISHER組的吸光度值在轉(zhuǎn)染36h后低于NC組,差距有統(tǒng)計學(xué)意義(t36=2.638, P<0.05, t48=2.554, P<0.05);劃痕實驗顯示si-PUNISHER組細胞遷移率低于NC組(t=3.136 P<0.05)(3)流式細胞術(shù)顯示si-PUNISHER組中血管平滑肌細

5、胞的凋亡細胞數(shù)多于NC組(x2=4.245, P<0.05);(4)經(jīng)線粒體染色,共聚焦顯微鏡下觀察到si-PUNISHER組細胞線粒體分裂明顯多于NC組(5)蛋白印跡法顯示si-PUNISHER組bcl-2、caspase330kD和p53蛋白表達明顯低于NC組(tbcl-2=9.546, P<0.05, tcapase330KD=5.647, P<0.05, tp53=5.42, P<0.05),caspase317kD,OPA1蛋

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論