多柔比星硫酸軟骨素-聚（乳酸-羥基乙酸）聚合物自組裝納米粒的研究.pdf

1、多柔比星(Doxorubicin，DOX)是目前臨床上較常使用的一種化療藥物，其抗瘤譜廣，抗癌作用強(qiáng)。但其半衰期較短，且有較多毒副作用，如心臟毒性、肝腎毒性及骨髓抑制等，這些特點(diǎn)使多柔比星的應(yīng)用受到了限制。因此，延長(zhǎng)多柔比星的體內(nèi)駐留時(shí)間，降低其毒副作用對(duì)其應(yīng)用具有重要意義。
　　聚合物自組裝納米粒是由兩親性聚合物通過(guò)疏水作用驅(qū)動(dòng)自組裝形成的具有核-殼結(jié)構(gòu)的納米粒子。聚合物中疏水段聚集形成內(nèi)核，可包載難溶性藥物;親水骨架包繞在納米

2、粒的外層發(fā)揮保護(hù)作用。由于聚合物自組裝納米粒具有粒徑小、穩(wěn)定性好、載藥量高、釋藥緩慢持久等優(yōu)勢(shì)而被廣泛研究。其中，基于聚多糖的自組裝納米粒，更因其具有良好的生物學(xué)特性而得到了廣泛關(guān)注。
　　硫酸軟骨素(Chondroitin sulfate，Chs)是一種生物內(nèi)源性的糖胺聚糖，具有優(yōu)良的理化性質(zhì)，表面具有多個(gè)可以被疏水基團(tuán)修飾的位點(diǎn)，如羧基、羥基等，可以被修飾成具有自組裝性質(zhì)的兩親性聚合物。本文以硫酸軟骨素為親水骨架，以聚（乳酸-

3、羥基乙酸）(PLGA)為疏水基團(tuán)，合成了一種新型兩親性聚合物---硫酸軟骨素-聚（乳酸-羥基乙酸）(Chs-g-PLGA)用于構(gòu)建聚合物自組裝納米粒。通過(guò)利用該兩親性聚合物包載多柔比星以期提高多柔比星的抗腫瘤效果，降低多柔比星的毒副作用。
　　Chs-g-PLGA的合成通過(guò)兩步酰胺反應(yīng)實(shí)現(xiàn)，以己二酸二酰肼(ADH)作為連接鏈。首先，將ADH與硫酸軟骨素上的羧基相連。然后，將活化后的PLGA與ADH另一端的氨基反應(yīng)得到Chs-g-P

4、LGA。利用氫核磁共振圖譜和紅外圖譜確證了聚合物的結(jié)構(gòu)，用芘熒光探針?lè)y(cè)定了其臨界聚集濃度。通過(guò)探頭超聲法制備了Chs-g-PLGA自組裝納米粒并考察了其理化性質(zhì)，PLGA分子量變大時(shí)，聚合物納米粒粒徑變小，臨界聚集濃度亦降低。選取Chs-g-PLGA2K包載多柔比星，得到的載藥納米粒為類球形實(shí)體，分布均勻，粒徑在160 nm左右，載藥量為11.4％。利用透析袋法考察了DOX/Chs-g-PLGA2K自組裝納米粒在兩種不同pH值環(huán)境中的

5、釋放行為。結(jié)果顯示該納米粒具有明顯緩釋特性，且釋放行為具有一定的pH依賴性，在低pH下釋放較快。
　　通過(guò)SRB法評(píng)價(jià)了Chs-g-PLGA2K對(duì)正常細(xì)胞(L929)和癌細(xì)胞(MCF-7)的毒性，以及DOX/Chs-g-PLGA2K納米粒對(duì)MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。結(jié)果顯示聚合物對(duì)兩種細(xì)胞均無(wú)毒性，安全性較好;載藥納米粒與鹽酸多柔比星溶液對(duì)MCF-7細(xì)胞有相當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)抑制作用。利用熒光顯微鏡觀測(cè)了載多柔比星納米粒被MCF-7細(xì)胞

6、攝取的情況。結(jié)果顯示MCF-7細(xì)胞能夠攝取該納米粒，多柔比星在細(xì)胞內(nèi)能夠被釋放并到達(dá)細(xì)胞核部位，發(fā)揮作用。
　　大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)結(jié)果顯示多柔比星經(jīng)聚合物材料Chs-g-PLGA2K包載后，其最大血藥濃度、藥時(shí)曲線下面積及平均滯留時(shí)間均明顯提高，顯著延長(zhǎng)了多柔比星的血液循環(huán)時(shí)間，有利于納米粒通過(guò)EPR效應(yīng)聚集于腫瘤區(qū)域發(fā)揮作用。
　　測(cè)定了聚合物材料的溶血行為，結(jié)果證明在實(shí)驗(yàn)條件下Chs-g-PLGA2K的溶血率低于5％，無(wú)溶血

7、風(fēng)險(xiǎn)。使用昆明小鼠測(cè)定了載藥納米粒的最大耐受量(MTD)，結(jié)果顯示多柔比星經(jīng)Chs-g-PLGA2K包載后MTD約為鹽酸多柔比星溶液的2倍，提高了多柔比星的安全性。
　　建立了昆明小鼠皮下肝癌模型，考察了DOX/Chs-g-PLGA2K納米粒的體內(nèi)分布和抗腫瘤效果。體內(nèi)分布結(jié)果顯示，與鹽酸多柔比星溶液相比，DOX/Chs-g-PLGA2K納米粒增強(qiáng)了藥物在腫瘤部位的蓄積。對(duì)肝癌小鼠靜脈給藥治療，監(jiān)測(cè)小鼠腫瘤體積，結(jié)果顯示DOX/C

8、hs-g-PLGA2K組抗腫瘤療效明顯高于鹽酸多柔比星溶液組。治療結(jié)束后，將小鼠脫頸處死，分離其心、肝、脾、肺、腎和腫瘤組織，蘇木精與伊紅染色評(píng)估治療后藥物對(duì)臟器的損傷情況以及引起腫瘤組織壞死情況，結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明了上述優(yōu)勢(shì)，載藥納米粒組肝癌組織出現(xiàn)大面積壞死。
　　綜上，本文合成了新型兩親性共聚物Chs-g-PLGA，并以此作為多柔比星的載體制備了DOX/Chs-g-PLGA2K自組裝納米粒制劑。該納米粒制劑能增強(qiáng)多柔比星的抗腫瘤