2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  WNK激酶是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族中的成員, WNK1基因突變會導(dǎo)致一種人類常染色體顯性遺傳的新型家族性高血壓疾病,稱為假性醛固酮減少癥Ⅱ型(pseudohypoaldosteronism typeⅡ, PHAⅡ)。機(jī)體血壓平衡與腎臟水鈉代謝相關(guān),已發(fā)現(xiàn)WNK1激酶在腎臟鈉離子的重吸收中起著重要的調(diào)控作用,然而WNK1是否調(diào)節(jié)腎臟水的轉(zhuǎn)運(yùn)完全未知。本研究利用WNK1(1-491)腎臟特異性過表達(dá)的

2、轉(zhuǎn)基因小鼠探索WNK1激酶對腎臟水通道蛋白的調(diào)控作用。
  方法:
  1、設(shè)計(jì)并構(gòu)建WNK1(1-491)腎臟特異性過表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠模型。
  2、利用無創(chuàng)血壓計(jì)測量小鼠血壓,用小鼠代謝籠測定小鼠飲水量、尿量,利用冰點(diǎn)滲透壓儀檢測小鼠血尿滲透壓,用酶聯(lián)免疫法檢測小鼠血漿AVP濃度。
  3、通過分子生物學(xué)技術(shù)如實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫印跡、組織免疫熒光等分別在mRNA、蛋白水平上分析腎臟水通道蛋白AQP1、A

3、QP2、AQP3、AQP4的表達(dá)情況。
  4、設(shè)計(jì)脫水和灌水實(shí)驗(yàn),觀察野生型和轉(zhuǎn)基因小鼠的血壓、尿量、血尿滲透壓以及血漿AVP水平變化。
  5、檢測脫水和灌水前后野生型和轉(zhuǎn)基因小鼠的腎臟水通道蛋白AQP1、AQP2、AQP3、AQP4的mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)情況。
  6、設(shè)計(jì)dDAVP注射實(shí)驗(yàn),檢測野生型小鼠注射前后WNK1激酶和水通道蛋白的mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)情況
  結(jié)果:
  1、

4、WNK1(1-491)腎臟特異性過表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠模型構(gòu)建成功。
  2、在正常情況下,與野生型小鼠相比,轉(zhuǎn)基因小鼠飲水量、尿量顯著下降,尿滲透壓明顯升高,血滲透壓下降,血漿AVP水平顯著升高。
  3、在正常情況下,與野生型小鼠相比,轉(zhuǎn)基因小鼠腎臟水通道蛋白AQP2蛋白表達(dá)量顯著升高而AQP1、AQP3、AQP4無明顯差異。
  4、相較于正常情況下,脫水后野生型和轉(zhuǎn)基因小鼠尿量都下降、血尿滲透壓都上升,但轉(zhuǎn)基因小鼠

5、變化不如野生型小鼠明顯。此外野生型小鼠血AVP水平明顯升高,而轉(zhuǎn)基因小鼠血AVP濃度變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  5、相較于正常情況下,脫水后野生型小鼠AQP1、AQP2、AQP4蛋白表達(dá)量明顯升高,而AQP3無明顯變化。而轉(zhuǎn)基因小鼠AQP4蛋白表達(dá)量明顯升高,而AQP1、AQP2、AQP3無明顯變化,即脫水消除了正常情況下野生型和轉(zhuǎn)基因小鼠中AQP2的表達(dá)差異。
  6、相較于正常情況下,灌水后兩組小鼠尿量都上升,尿滲透壓都下降

6、,血滲透壓都下降,血AVP均保持不變。但轉(zhuǎn)基因小鼠尿量上升不如野生型小鼠明顯,而血滲透壓下降更多。
  7、相較于正常情況下,灌水后兩組小鼠腎臟AQP2、AQP4蛋白都下降,AQP3蛋白表達(dá)量明顯上升,而AQP1含量保持不變,且灌水后野生型和轉(zhuǎn)基因小鼠間的AQP2差異縮小。
  8、注射dDAVP后,野生型小鼠腎臟中WNK1和AQP2的表達(dá)量均顯著升高。
  結(jié)論:
  我們的研究結(jié)果表明WNK1(1-491)過

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