走馬胎抗類風濕性關節(jié)炎有效部位篩選研究.pdf

1、目的:
　　篩選走馬胎抗類風濕性關節(jié)炎(RA)的有效部位，為走馬胎抗RA的物質基礎研究及抗RA新藥開發(fā)提供參考。
　　方法:
　　1.走馬胎化學成分預實驗、總三萜的含量測定及化學成分系統(tǒng)分離。通過顯色反應對走馬胎中各類化學成分進行檢查;以齊墩果酸為對照品，建立走馬胎中總三萜的含量測定方法;走馬胎用70％乙醇提取后拌硅藻土，70℃烘干，粉碎，依次用石油醚(30～60℃)、乙酸乙酯、水飽和的正丁醇、水進行萃取。
　　

2、2.走馬胎抗RA有效部位篩選及其安全性研究。通過研究走馬胎石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位對角叉菜膠致小鼠足跖腫脹的影響、對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響、對醋酸致小鼠疼痛扭體的影響、對類風濕性關節(jié)炎滑膜成纖維細胞MH7A增殖抑制的影響篩選走馬胎抗RA的有效部位;參考最大給藥量實驗，一次性給予150倍臨床等效劑量，研究走馬胎總提取物及各提取部位的安全性。
　　3.走馬胎石油醚部位抗佐劑性關節(jié)炎的實驗研究。本實驗以S

3、D大鼠右后足皮內注射弗氏完全佐劑建立佐劑性關節(jié)炎大鼠模型，通過AA大鼠的全身評分、關節(jié)炎指數(shù)評分、關節(jié)腫脹數(shù)、繼發(fā)側關節(jié)腫脹度、血清中MDA含量、致炎側足組織中PGE2含量、臟器指數(shù)來評價走馬胎石油醚部位對佐劑性關節(jié)炎的療效。
　　結果:
　　1.走馬胎含有氨基酸、多糖、有機酸、鞣質、異香豆素類、三萜皂苷類、揮發(fā)油類等成分;以齊墩果酸為對照品，建立走馬胎中總三萜的含量測定方法，回歸方程為A=0.0654C-0.1114(R=

4、0.9997)，樣品的濃度在3.333～16.667μg·mL-1范圍內線性關系良好，精密度、60～120min內穩(wěn)定性、重復性的RSD分別為0.84％、2.62％、1.43％，加樣回收率為97.64％(RSD=1.29)，均符合要求。
　　2.走馬胎各提取部位均能減輕角叉菜膠致小鼠足腫脹的腫脹度，同時抑制醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性的增加，表現(xiàn)出明顯的抗炎作用，走馬胎能減少醋酸致小鼠疼痛扭體次數(shù)，表現(xiàn)出顯著的鎮(zhèn)痛作用，其中石油醚

5、部位抗炎、鎮(zhèn)痛作用較為突出;走馬胎石油醚部位能顯著抑制MH7A細胞的增殖，抑制作用呈劑量依賴性，IC50分別為68.1μg·mL-1;走馬胎總提取物及各部位提取物均無明顯的毒性，14d內無動物死亡，解剖后未見明顯的病理改變，體重與空白對照組相比無明顯差異。以上結果提示，走馬胎石油醚部位可能有抗RA的作用，且無明顯毒性。
　　3.走馬胎石油醚部位各劑量組均能降低AA大鼠的全身評分，改善全身炎癥癥狀，同時能減少AA大鼠的關節(jié)炎指數(shù)評分

6、、關節(jié)腫脹數(shù)及繼發(fā)側關節(jié)腫脹度，具有顯著的消腫作用，顯著改善關節(jié)炎癥癥狀;走馬胎石油醚部位各劑量能顯著降低AA大鼠血清中MDA含量，表現(xiàn)出一定的抗氧化作用;走馬胎石油醚部位各劑量能顯著降低AA大鼠的致炎側足組織中PGE2含量，說明其抗炎作用與抑制PGE2合成或釋放有關;走馬胎石油醚部位各劑量組均能降低AA大鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)，表現(xiàn)出一定的免疫抑制作用;走馬胎石油醚部位還能降低AA大鼠的肝臟指數(shù)。以上結果提示，走馬胎石油醚部位為抗RA