丙酮酸脫氫酶復(fù)合體激活NLRP3炎癥小體并增加單核細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞的黏附.pdf

1、目的：
　　丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDC)是位于線粒體的催化丙酮酸脫羧成乙酰輔酶A的復(fù)雜酶系。PDC介導(dǎo)一系列病理生理過(guò)程包括乳酸性酸中毒、高血壓、腫瘤細(xì)胞突變等。目前尚不清楚 PDC是否介導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化的病理生理過(guò)程。動(dòng)脈粥樣硬化被認(rèn)為是一種慢性炎癥過(guò)程，其中NLRP3炎癥小體起著重要的作用。本課題，我們探討PDC對(duì)NLRP3炎癥小體的活化及其隨后在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中所起的潛在作用。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)分為四組

2、：對(duì)照組、氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)組、二氯乙酸鈉(DCA)組和雷諾嗪組。細(xì)胞模型采用人單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞系THP1細(xì)胞。用DCA(1 mM)或雷諾嗪(5μM)分別直接或間接地激活PDC。免疫印跡(Western blot)分析用來(lái)確定NLRP3和其下游蛋白半胱氨酸蛋白酶-1、白細(xì)胞介素(IL)-1β，和 IL-18的蛋白表達(dá)水平。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)用于確定釋放到培養(yǎng)上清液中的IL-1β和IL-18。用共培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)

3、皮細(xì)胞(HUVEC)和 THP-1單核細(xì)胞的方法測(cè)定單核細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞的黏附功能。
　　結(jié)果︰
　　DCA，類似于Ox-LDL，增加了NLRP3和其下游蛋白半胱氨酸蛋白酶-1、IL-1β和IL-18蛋白表達(dá)量。IL-1β和IL-18釋放到上清液的量也隨著DCA的處理而增加，表明在THP-1細(xì)胞，PDC可激活NLRP3炎癥小體的活化。DCA所介導(dǎo)的PDC和NLRP3的活化可致單核細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞的粘附功能增加，提示PDC的活化在