維生素D3對炎癥相關性結直腸癌的影響及作用機制的探究.pdf

1、本文從以下幾部分闡述維生素D3對炎癥相關性結直腸癌的影響及作用機制的探究。
　　第一部分 1，25-二羥維生素D3對結腸癌細胞的影響研究
　　目的：探究1，25-二羥維生素D3(1，25(OH)2D3)對SW480結腸癌細胞的E-cadherin、PLEKHA7、miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達水平的影響，以及SW480細胞的PLEKHA7是否可以調控microRNA的表達水平。
　　

2、方法：給予SW480細胞100nmol/L1，25(OH)2D3或等量的DMSO干預48小時，用qRT-PCR和Western blotting檢測E-cadherin、PLEKHA7的mRNA和蛋白表達水平，以及miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達水平。通過轉染siPLEKHA7敲降PLEKHA7的表達，用qRT-PCR檢測miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達水平。
　

3、　結果：(1)100nmol/L1，25(OH)2D3干預48小時可以上調SW480細胞E-cadherin和PLEKHA7蛋白表達水平;(2)100nmol/L1，25(OH)2D3干預48小時可以使SW480細胞的miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達水平顯著上升(p＜0.05);(3)在SW480結腸癌細胞中，敲降PLEKHA7后miR-24的表達水平顯著下降(p＜0.05)。
　　結論：1，25

4、(OH)2D3可以上調SW480細胞的E-cadherin、PLEKHA7蛋白表達水平以及miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達水平;8W480細胞的PLEKHA7參與miR-24表達水平的調控。
　　第二部分 維生素D3對炎癥相關性結直腸癌小鼠模型的干預研究
　　目的：探究維生素D3(VitD3)對氧化偶氮甲烷(AOM)聯(lián)合葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導的小鼠炎癥相關性結直腸癌的治療效果及其作用機制

5、。
　　方法：雄性C57BL/6小鼠隨機分為6組，第1組為空白對照組(Control)，不灌胃。第2-6組建立炎癌模型，其中第2組為模型對照組(Model)，不灌胃;第3組為鹽水對照組(0)，從撤除2.5％DSS后（即W4）開始給予等量生理鹽水灌胃;第4-6組為維生素D低、中、高劑量干預組，從撤除2.5％DSS后開始分別給予15、30和60IU/g/周的維生素D3（VitD3，商品名：英康利）灌胃。12周末統(tǒng)計小鼠結直腸成瘤數(t

6、umor number，TN)和瘤負荷(tumor load，TL)，進行病理組織學評估，分別采用qRT-PCR和免疫組織化學染色對比結腸組織E-cadherin、PLEKHA7的mRNA和蛋白表達水平，并用qRT-PCR對比miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達水平。
　　結果：(1)與鹽水對照組(n=9，TN=7.44±0.53，TL=14.61±0.98mm)相比，中（n=9，TN=4.11±0.

7、68，TL=6.94±1.69mm）和高劑量干預組(n=10，TN=4.40±0.64，TL=8.10±1.95mm)的維生素D3治療可以顯著降低AOM/DSS炎癌小鼠的成瘤數和瘤負荷(p＜0.05);(2)免疫組織化學結果顯示VitD3可以提高AOM/DSS炎癌小鼠E-cadherin蛋白在結直腸上皮細胞細胞膜上的表達水平，中和高劑量干預組的免疫組織化學評分(3.89±0.42，3.80±0.39)均顯著高于鹽水對照組(2.44±0.

8、44，p＜0.05);(3)免疫組織化學結果顯示VitD3可以提高AOM/DSS炎癌小鼠PLEKHA7蛋白在結直腸上皮細胞細胞膜上的表達量，高劑量干預組PLEKHA7免疫組織化學評分(4.80±0.29)顯著高于鹽水對照組(3.111±0.31，p＜0.05)，且E-cadherin和PLEKHA7蛋白的免疫組織化學評分具有相關性(相關系數為0.741，P＜0.0001);(4)模型對照組結直腸組織miR-19a的表達水平與正常小鼠相比