復方四黃外洗液對MRSA的抑菌作用研究.pdf

1、目的:
　　探討復方四黃外洗液對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistantstphylococus aureu，MRSA）的抑菌作用、抑菌機制以及復方對抗MRSA生物膜的作用，為復方四黃外洗液進一步研發(fā)并應(yīng)用于臨床感染性疾病提供基礎(chǔ)研究。
　　方法:
　　本課題主要由三部分組成。
　　(1)復方四黃外洗液及其所含單味中藥對MRSA的體外抑菌作用。紙片擴散法(Kirby-Bauer，K-B

2、)測定不同濃度的復方四黃外洗液及其所含大黃、黃連、黃芩、黃柏、虎杖、連翹六種中藥體外抑制受試MRSA菌株在瓊脂上生長的情況;試管二倍稀釋法測定復方四黃外洗液及大黃、黃連、黃芩、黃柏、虎杖、連翹抑制MRSA生長的最小抑菌濃度(MIC);考察和比較復方及單藥的抑菌效果。
　　(2)復方四黃外洗液對MRSA抑菌機制研究。檢測不同濃度復方四黃外洗液作用下MRSA菌液中堿性磷酸酶(ALP)、肽聚糖的活性改變以及鉀鎂離子的滲漏情況。探討復方四

3、黃外洗液對MRSA的抑菌機制。
　　(3)復方四黃外洗液對MRSA生物膜黏附及形成的影響。剛果紅瓊脂法篩選產(chǎn)生物膜的MRSA菌株。微孔板法復制MRSA體外黏附及生物膜模型，采用CCK-8法評價不同濃度復方四黃外洗液對MRSA黏附、生物膜形成的影響;油鏡觀察MRSA物膜形成情況。
　　結(jié)果:
　　(1)復方四黃外洗液及其單味中藥均有不同程度的抑制受試MRSA在瓊脂培養(yǎng)基上的生長，而同種藥物濃度下，量取的抑菌圈直徑從大到小

4、排列依次為:黃連＞復方＞黃芩＞大黃＞連翹＞黃柏＞虎杖，同一種藥物抑菌圈大小隨藥物濃度降低而變小，成濃度依賴性;黃連、黃芩、連翹及復方四黃外洗液對受試MRSA菌液的MIC均為31.3mg/mL，而黃柏最優(yōu)，對MRSA的MIC僅為15.7 mg/mL，大黃為62.5 mg/mL，虎杖高達125.0 mg/ml。
　　(2)復方四黃外洗液作用于MRSA菌液后可導致菌體細胞外ALP的活性增加以及K+、Mg2+的濃度改變，但對肽聚糖的活性無

5、明顯作用。推測復方四黃外洗液可能通過改變細菌細胞膜以及細胞壁的通透性抑制MRSA的生長。
　　(3)剛果紅瓊脂實驗中，臨床分離到的34株金黃色葡萄球(Staphylococcusaureus，S.aureus)中產(chǎn)生物膜的菌株共12株，占待測菌株35.2％，其中MSSA產(chǎn)生物膜的菌株數(shù)占22.7％，而MRSA產(chǎn)生物膜的菌株數(shù)占63.6％，MRSA產(chǎn)生物膜形成率顯著高于MSSA（P＜0.05）;產(chǎn)生物膜S.aureus菌株，即PIA

6、陽性菌株對多種抗菌藥物存在高耐，對紅霉素、左氧氟沙星、四環(huán)素耐藥率分別為75％、50％、66.7％，其中PIA陽性金黃色葡萄球菌對紅霉素及左氧氟沙星的耐藥率均高于與PIA陰性金黃色葡萄球菌，差異有統(tǒng)計意義（P＜0.05）。尚未發(fā)現(xiàn)耐萬古霉素耐菌株。生物膜實驗中，復方四黃外洗液對MRSA的黏附具有抑制作用，且抑制作用具有濃度依賴性，與陰性對照組相比均有統(tǒng)計意義（P＜0.05）。但是在短時間(3h)內(nèi)各組藥物對MRSA的黏附作用無明顯差異（

7、P＞0.05）;復方四黃外洗液對MRSA菌24h形成的生物膜具有抑制作用，31.25mg/mL濃度組濃度組對生物膜的抑制率達到75.3％;其作用具有濃度依賴性，除7.81mg/L濃度組及3.90mg/L濃度組外，其余各組與RPMI1640陰性對照組相比均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。光鏡下，復方四黃外洗液均可抑制MRSA胞外多糖物質(zhì)的分泌。
　　結(jié)論:
　　復方四黃外洗液在體外可抑制MRSA的生長，其機理可能是通過改變細菌細