轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及Six1基因表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:探討TGF-β1對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及Six1基因表達(dá)的影響。
　　方法:體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞（16HBE），構(gòu)建上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化模型。采用倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)的變化；采用Real-time PCR檢測(cè)E-鈣黏蛋白、波形蛋白、α-肌動(dòng)蛋白、纖維黏連蛋白及Six1基因 mRNA表達(dá)的情況；采用Westernblotting檢測(cè)E-鈣黏素、波形蛋白、α-肌動(dòng)蛋白、纖維黏連蛋白及Six1蛋白的表達(dá)變化。
　

2、　結(jié)果:1.倒置顯微鏡結(jié)果示:對(duì)照組細(xì)胞呈單層，細(xì)胞間連接較為緊密；處理組A細(xì)胞形態(tài)變化不明顯；處理組B部分細(xì)胞出現(xiàn)肥大、拉長(zhǎng)，細(xì)胞間連接緊密性下降；處理組C細(xì)胞形態(tài)變化較為明顯，呈梭行，同時(shí)細(xì)胞間隙增大，喪失典型的鋪路石樣特征。
　　2.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果示：對(duì)照組細(xì)胞可正常表達(dá)E-鈣黏素基因、波形蛋白基因、纖維黏連蛋白基因、α-肌動(dòng)蛋白基因及Six1基因 mRNA；與對(duì)照組相比較，處理組A其E-鈣粘素基因、α-肌動(dòng)蛋白基因m

3、RNA表達(dá)量降低（P值分別為0.862、0.566，均＞0.05），Six1基因mRNA表達(dá)量增高（P值為0.102＞0.05），差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，波形蛋白基因、纖維黏連蛋白基因 mRNA表達(dá)量顯著升高（P值分別為0.003、0.006＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。處理組B其E-鈣粘素基因mRNA表達(dá)量明顯減少（P=0.042），波形蛋白基因、纖維黏連蛋白基因、α-肌動(dòng)蛋白基因及Six1基因 mRNA表達(dá)量均顯著增加（P=0.000

4、、0.001、0.031、0.023，均小于0.05），與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。處理組C其E-鈣粘素基因mRNA表達(dá)量顯著減少（P=0.004＜0.01），波形蛋白基因、纖維黏連蛋白基因、α-肌動(dòng)蛋白基因及Six1基因 mRNA表達(dá)量均明顯增加（P=0.004、0.003、0.023、0.004，均小于0.05），與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.Westernblot檢測(cè)結(jié)果示：對(duì)照組細(xì)胞能夠正常表達(dá)E-鈣粘素、

5、α-肌動(dòng)蛋白、纖維黏連蛋白、波形蛋白及Six1蛋白。與對(duì)照組相比，處理組A細(xì)胞中E-鈣粘素表達(dá)減少（P=1.023＞0.05），α-肌動(dòng)蛋白、纖維黏連蛋白及波形蛋白的表達(dá)量增高（P值分別為0.789、0.542、0.624，均＞0.05），但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Six1蛋白表達(dá)量增加（P=0.028＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；處理組B細(xì)胞中E-鈣粘素表達(dá)量明顯減少（P=0.011＜0.05），α-肌動(dòng)蛋白、纖維黏連蛋白、波形蛋白及S

6、ix1蛋白的表達(dá)量均顯著增加（P值分別為0.002、0.001、0.004、0.009均＜0.01），與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；處理組C細(xì)胞中E-鈣粘素表達(dá)量顯著減少（P=0.009＜0.01），α-肌動(dòng)蛋白、波形蛋白及Six1蛋白的表達(dá)量顯著增加（P值分別為0.008、0.003、0.007，均＜0.01），纖維黏連蛋白表達(dá)量明顯增加（P值為0.017＜0.05），與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且隨TGF-β1作用時(shí)間越長(zhǎng)，S